Microbiologia medica

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8 - ANTIBIOGRAMA 8. ANTIBIOGRAMA

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Un antibiótico es una sustancia de origen biológico que inhibe el crecimiento de los microorganismos a concentraciones muy bajas. Un antibiograma es un estudio de la sensibilidad "in vitro" de un microorganismo patógeno frente a las sustancias antimicrobianas. Existen distintos métodos siendo los más importantes los de : Difusión: Habitualmentecualitativos. Atendiendo al halo de inhibición que aparece alrededor del disco, se clasifican los microorganismos como sensibles (S), intermedios (I) o resistentes (R) según sea la eficacia obtenida por el agente amtimicrobiano frente al microorganismo. Dilución: Es un estudio cuantitativo. Se emplean una serie de tubos con distintas concentraciones de agente antimicrobiano (4-128 g/ml). Se observa elcrecimiento de los microorganismos mediante la aparición de turbidez, o el cambio de color del indicador incorporado al medio. La sensibilidad de una bacteria a un antibiótico viene dada por la C.M.I. es la concentración mínima inhibitoria, representa la mínima cantidad de antimicrobiano capaz de inhibir el crecimiento de un microorganismo. C.M.B. concentración mínima bactericida. Es la concentraciónmínima que mata el microorganismo. Normalmente, la CMI es suficiente para combatir una determinada infección ya que los mecanismos inmunitarios se encargan de eliminar al microorganismo. Detección de beta lactamasas: Algunos microorganismos son capaces de producir estas enzimas, que destruyen los derivados del grupo de las penicilinas, hidrolizando el anillo betalactámico. Se aplica esta prueba alos siguientes microorganismos: Staphylococcus aureus, Haemóphilus influenzae y Neisseria gonorrhoeae. El antibiograma por el método de difusión en agar es una de las pruebas utilizadas para determinar la sensibilidad de un microorganismo frente a un antibiótico. En esta prueba se enfrenta la bacteria inoculada sobre la superficie de un medio de agar a una solución antibiótica absorbida en discosde papel de filtro o en pastillas. Procedimiento: 1. Preparar 3 placas Petri con agar Müeller Hinton. 2. A partir de un cultivo fresco de las bacterias que hay que ensayar (E. coli, Staphilococcus, ...), inocular 4-5 colonias en un tubo con 5 ml de caldo TSB. 3. Utilizando un hisopo de algodón sumergirlo en el inóculo y eliminar el exceso presionándolo sobre la pared interna del tubo.

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4. Inocular la superficie de una placa de agar Müeller Hinton con el hisopo pasándolo uniformemente por toda la superficie en tres direcciones. Por ultimo, pasar el hisopo por el reborde de la placa. 5. Dejar secar 10 min con la tapa algo abierta (junto al mechero). 6. Preparación de los discos con antibiótico. Disolver una cápsula, comprimido, gragea o vial de antibiótico enagua destilada; elegir una presentación de antibiótico fácilmente soluble (Calcular el volumen de dilución que precisa cada tipo de antibiótico, según la tabla 8.1). 7. Preparar un banco de diluciones (-1, -2) con agua destilada. 8. Con micropipeta Pasteur impregnar los discos para antibiograma con 1 gota de micropipeta (32 l) de las disoluciones de antibiótico (se puede utilizar la misma pipetasi se realiza de menor a mayor concentración). Anotar la concentración y el volumen de antibiótico añadido en cada disco.

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9. Colocar el disco de antibiótico (con pinzas estériles) sobre la superficie del agar y apretarlo suavemente sobre la superficie del medio. Los discos no deben estar a menos de 15 mm de los bordes de la placa y a unos 20 mm uno de otro para que nose superpongan las zonas de inhibición. (No mover los discos una vez implantados). 10. Realizar la operación con: a. Placa 1 (Staphilococcus):3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Amoxicilina. b. Placa 2 (Staphylococcus):3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Penicilina G c. Placa 3 (E.coli): 3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Amoxicilina, 3 discos con las diluciones (1,-1, -2...
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