microbiologia

Tema 12. Medida del crecimiento bacteriano
III.B. Nutrición, metabolismo y crecimiento

Tutoría.
• Introducción al metabolismo bacteriano
Tema 8.
• Nutrición y metabolismo: Requerimientos nutricionales
Tema 9.
• Metabolismo de quimioorganoheterótrofos
Tema 10.
T
10
• Metabolismo de quimiolitoautótrofos y fototrofos
Tema 11.
• Crecimiento bacteriano
Tema 12.
• M did del crecimientopoblacional
Medida d l
i i
bl i
l
Tema 13.
• Acción de agentes físicos sobre el crecimiento

1

Tema 12. Medida del crecimiento bacteriano
1. Métodos de determinación del número de células
1.1. METODOS DIRECTOS
• Recuento en cámara de Petroff-Hauser
•C
Contadores electrónicos de partículas (Coulter)
ó
í
(C
)
1.2. MÉTODOS INDIRECTOS
• Recuento de viables en placa
• Recuentoen filtros de membrana
• Recuento del : número más probable (NMP)
2. Métodos de determinación de la masa celular
2.1. METODOS DIRECTOS GRAVIMÉTRICOS
•P
Peso hú d
húmedo
• Peso seco
2.2. METODOS INDIRECTOS
• De componentes del cultivo: Nitrógeno total, ARN, ADN; proteínas….
• De la actividad metabólica: consumo de un nutriente característico,
consumo de oxígeno (respiración)
• Métodosturbidimétricos: espectrofotométricos

Tema 12. Medida del crecimiento bacteriano

Objetivos del tema:
j
1. Diferenciar entre métodos directos e indirectos de la medida del crecimiento
microbiano
2. Conocer los diferentes métodos de estimar el número de células
microbianas y discutir las limitaciones
3. Conocer los diferentes métodos de estimar la biomasa microbiana y discutir
suslimitaciones
4. Aprender a aplicar los métodos de medida del crecimiento bacteriano e
interpretar los resultados
5. Comprender la aplicación y utilidad de los métodos de medida del
crecimiento bacteriano

Tema 12. Medida del crecimiento bacteriano
1. Métodos de determinación del número de células
1.1. METODOS DIRECTOS
• Recuento en cámara de Petroff-Hauser
•C
Contadores electrónicos departículas (Coulter)
ó
í
(C
)
1.2. MÉTODOS INDIRECTOS
• Recuento de viables en placa
• Recuento en filtros de membrana
• Recuento del : número más probable (NMP)
2. Métodos de determinación de la masa celular
2.1. METODOS DIRECTOS GRAVIMÉTRICOS
•P
Peso hú d
húmedo
• Peso seco
2.2. METODOS INDIRECTOS
• De componentes del cultivo: Nitrógeno total, ARN, ADN; proteínas….
• De la actividadmetabólica: consumo de un nutriente característico,
consumo de oxígeno (respiración)
• Métodos turbidimétricos: espectrofotométricos

Tema 12. Medida del crecimiento bacteriano

1. Métodos de medida del número de células
1.1. Métodos directos: recuento de células totales

Cámara de Petroff-Hauser
Petroff Hauser

Se coloca la muestra entre la cámara y el cubre sin que rebose. Elespacio que queda es de
0.02mm. La rejilla tiene 25 celdillas mayores y un total de 400. Un área total de 1mm2 y volumen
de 0.02mm3
Nº de células /ml = nº células /nº celdillas/ vol celdilla
vol celdilla= 0.02/400 mm3 = 5.10-5 mm3= 5. 10-8 ml

43 células en 16 celdillas

Nº células= 43/16/5. 10-8

Nº células/ml = 0.5375.108
Nº células/ml = 5,375 107

Tema 12. Medida del crecimientobacteriano

Cámara de Petroff-Hauser

Ventajas

Inconvenientes

Tema 12. Medida del crecimiento bacteriano

1. Métodos de medida del número de células
1.1. Métodos directos: recuento de células totales
• Contadores electrónicos de partículas (Contador Coulter)
vacio
Electrodo
interno
Electrodo
El t d
externo
Electrolito con
bacterias
(particulas) en
suspensión
Orificio

Tubo decristal

Técnica b
Té i basada en la diferencia de conductividad entre
d
l dif
i d
d ti id d t
las células y el fluido en el que están suspendidas

Tema 12. Medida del crecimiento bacteriano
1. Métodos de determinación del número de células
1.1. METODOS DIRECTOS
• Recuento en cámara de Petroff-Hauser
•C
Contadores electrónicos de partículas (Coulter)
ó
í
(C
)
1.2. MÉTODOS...