Microscopia Electrónica En Virología

http://agro.unc.edu.ar/~fito/teoricos/MICROSCOPIA%20ELECTRONICA.htm
Introducción
La microscopía electrónica, la serología y las plantas indicadoras constituyen las principales herramientas para el diagnóstico y estudio de los virus vegetales.
Desde la invención del microscopio electrónico la Fitopatología ha realizado avances que sin él no hubieran sido posibles. Baste como ejemplo mencionarque en el año 1939, apenas iniciada su invención, permitió la observación directa de las partículas virales del virus del mosaico del tabaco (TMV).
En el año 1967, se observaron también por primera vez Mollicutes fitopatógenos y en 1971 viroides, siendo estos últimos los agentes infecciosos más pequeños conocidos hasta este momento.
La utilización del microscopio electrónico permitió detectarnumerosos casos de infecciones virales mixtas y conocer la importancia del estudio de la citopatología en las infecciones virales.

Poder de resolución y microscopía
El ojo humano posee un poder de resolución (distancia mínima entre dos puntos que permite detectarlos individualmente) de aproximadamente 0,1 mm (100 m).
Esto significa que si se miran dos puntos que están a menos de 0,1 mm uno delotro, se fusionan en uno solo. Del mismo modo dos líneas que estan a menor distancia entre ellas se ven como una sola.
La invención del microscopio óptico en el siglo XVII, permitió al hombre introducirse en el mundo de los microorganismos, hasta el limite determinado por su resolución.

El poder de resolución esta directamente relacionada con la longitud de onda de la fuente luminica y puedecalcularse según la fórmula de Abbe:

0,61 / A
PR = x 

siendo: PR: poder de resolución
 : longitud de onda del haz luminoso utilizado
A : apertura numérica del objetivo (tiene valores cercanos a 1,2)

de donde:

0,61 / 1,2
PR = x  ≈ 0,5 x 

De aquí se desprende que la resolución es aproximadamente la mitad de la longitud de onda del haz luminoso utilizado.

Para el caso delmicroscopio óptico, que utiliza la luz visible, cuya longitud de onda oscila entre 370 - 770 nm, el poder de resolución teórico nunca puede superar los 200 nm, aunque en la realidad por problemas de construcción la resolución es de aproximadamente 1.000 nm (1 m).
Por consiguiente, debido a la naturaleza submicroscópica de los virus vegetales, cuyos tamaños varían entre los 17 - 70 nm dediámetro para los virus isométricos y los 13 - 18 nm de diámetro por 500 - 2.000 nm de longitud para los flexuosos, para poder visualizarlos se necesita recurrir a instrumentos de mayor resolución, como es el microscopio electrónico.

El microscopio electrónico
Fundamento

Cuando De Broglie (1926) y Bush (1927) encontraron que las corrientes de electrones tenían una longitud de onda muy corta y quelos electrones se podían enfocar, el microscopio electrónico se hizo factible. Este utiliza la propiedad que poseen los haces de electrones de ser desviados por un campo electromagnético, en la misma forma en que un rayo de luz es refractado al atravesar una lente.
Por lo tanto el microscopio óptico y el electrónico se fundamentan en los mismos principios.
La construcción del microscopioelectrónico fue culminada por Knoll y Rudska (1932) y a partir de 1939 se comenzaron a producir en Alemania a escala comercial.
El poder de resolución teórico de un microscopio electrónico es de 0,02 Å. Sin embargo por diversos problemas de construcción se consigue en los mejores microscopios una resolución de 1 - 2 Å (0,1 - 0,2 nm). Este poder de resolución se obtiene porque los haces de electronesacelerados utilizados como fuente de iluminación poseen una longitud de onda mucho menor a la de la luz.
Funcionamiento

Básicamente consta de una fuente emisora de electrones y un tubo, "cañón", que contiene tres "lentes" que son bobinas electromagnéticas, el condensador, el objetivo y la lente proyectora (Fig. 1). Todo este sistema debe funcionar a un alto vacío ya que la presencia de...