microscopia

RELACIÓN DE
MAGNITUDES
ENTRE
COMPONENTES
VIVOS Y
ATOMOS

VISUALIZANDO LAS CÉLULAS

PODER DE RESOLUCIÓN

MICROSCOPIO ÓPTICO

1 µm (micrómetro) = 10-6 m
1 nm (nanómetro) = 10-9 m
A (Angstrom) =10-10 m

PREPARACIÓN DEL TEJIDO PARA MICROSCOPÍA ÓPTICA

MICROSCOPIA Y
ARQUITECTURA
CELULAR

1

REFRACCIÓN DE
LA LUZ A TRAVÉS
DE UNA LÁMINA
DE VIDRIO DE
CARAS
PARALELAS

1.-LENTES
POSITIVAS

REFRACCIÓN DE LA
LUZ A TRAVÉS DE
UNA LENTE PLANOCONVEXA

REFRACCIÓN DE LA
LUZ EN UNA LENTE
BICONVEXA

2.- LENTES
NEGATIVAS

MARCHA DE LOS
RAYOS LUMINOSOS
PARA LA FORMACIÓN
DE UNA IMAGEN REAL
(CASO DEL OBJETIVO)

PRINCIPIO DE LA
FORMACIÓN DE LA
IMAGEN EN EL
MICROSCOPIO
COMPUESTO

FORMACIÓN DE UNA IMAGEN
VIRTUAL
(CASO DEL OCULAR)

FORMACIÓN DE LAIMAGEN
MICROSCÓPICA

ABERRACIÓN
CROMÁTICA

ABERRACIÓN DE
ESFERICIDAD

2

LONGITUD DE ONDA (nm)

COLOR

1

340 -400

ULTRAVIOLETA (UV)

2

400 -430

VIOLETA

3

430 – 500

AZUL

4

500 -560

VERDE

5

560 -620

AMARILLO A
NARANJA

6

620 -700

NARANJA A ROJO

7

Sobre 700

CERCA INFRARROJO

CORRECCIÓN DE LA
ABERRACIÓN DE
ESFERICIDAD

ANGULODE APERTURA Y
APERTURA NUMÉRICA

Para sistema secos (aire interpuesto) la apertura
numérica es:
A.N.= 1 x seno 72°
A.N. =0,95
Inmersión en agua:
A.N.= 1,333 x seno 65°
= 1,333 x 0,906
= 1,20
APERTURA NUMÉRICA (AN)
AN = n x seno 

Inmersión en aceite

n = índice de refracción del medio interpuesto

A.N. = 1,515 x seno 67,5°

 = semi-ángulo de abertura

= 1,515 x 092
= 1,39MODIFICACIÓN DEL
VALOR DEL ÁNGULO DE
APERTURA POR LA
PRESENCIA DE UN
DIAFRAGMA

MARCHA DE LOS RAYOS LUMINOSOS AL PASAR DEL
CUBREOBJETOS AL OBJTIVO CUANDO EL MEDIO
INTERPUESTO ES AIRE (n= 1,0), AGUA (n= 1,333) O ACEITE
DE INMERSIÓN (n= 1,515)

3

Poder de resolución ( R ) y límite de resolución ( r )
MARCHA DE LOS RAYOS
LUMNINOSOS EMANADOS DE UN
PUNTO DEL PREPARADO EN UN :OBJETIVO DE INMERSIÓN
HOMOGÉNEA Y,
 EN UN OBJETIVO A SECO

 Poder de resolución es la facultad de los objetivos
de distinguir los más finos detalles de estructura y
ligeros contrastes de índice de refracción.
 Límite de resolución ( r ): es la menor distancia
entre dos puntos distintamente y ,este parámetro de
pende de:
 la longitud de onda de la luz utilizada y

INFLUENCIA DELESPESOR DEL
CUBREOBJETOS EN LA
MARCHA DE LOS
RAYOS LUMNINOSOS Y
EN LA NITIDEZ DE LA
IMAGEN
MICROSCÓPICA

 de la abertura numérica
r = 0,61 x 450 nm = 194 nm
1,5 x 0,94
r: 0,2 µm M. óptico

Resolución

160/0.17

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMISION
VIA ÓPTICA EN UN
MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE
TRANSMISIÓN

Límite resol. teórico: 0,002 nm
Práctica: 0,1 nm (1 Å)
Problemas:2 nm (20Å

4

PREPARACIÓN DEL TEJIDO PARA MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA

PREPARACIÓN DE UNA
MUESTRA DE TEJIDO PARA
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

MICROFOTOGRAFIA ELECTRONICA
DE TRANSMISION

MICROFOTOGRAFIA ELECTRONICA
DE TRANSMISION

Fawcett, 1966

Comparando microscopio óptico y microscopio electrónico

5

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO

Cinco imágenes diferentes del mismo mosquitoFotomicrografía
electrónica de barrido
de los glóbulos rojos.
Las células tienen una
forma bicóncava y
carecen de núcleo y
otros organelos.

ÓVULO Y ESPERMIOS



Microscopio de transmisión electrónica
•
•
•
•
•



Resolución teórica: 0,005 nm; en la práctica 0,1 nm –
1 nm (2000x mayor que el microscopio óptico)
Un haz de electrones a alta velocidad pasa a través
de lamuestra
Grosor de la muestra 50-100 nm
Imagen 2-D – detalles de la superficie son revelados
Organelos subcelulares

Microscopía electrónica de barrido
•
•
•

Resolución aproximada de 10 nm
Los electrones secundarios liberados desde el metal
cubren el especimen no seccionado
Imagen de la superficie en 3-D

6

Sistema óptico de un microscopio de fluorescencia

FLUORÓFOROS

La...