Modelo para la elaboración de las guías de laboratorio

Foretell Lab
Manual de Procedimientos de Inmunología Clínica
Guía No. 11

Nombre del procedimiento:
Determinación Cualitativa de Anticuerpos anti-nucleares
Fundamento:
Detección de una reacciónantígeno anticuerpo entre los antígenos nucleares presentes en las células Hap-2 fijas al soporte y loas anticuerpos anti nucleares presentes en la muestra del paciente.
Materiales y reactivos:COMPOSICIÓN
A. Portaobjetos: Células HEp2 cultivadas en cada pocillo.

B. PBS (10x): Fosfato de sodio 112,5 mmol/L, fosfato de potasio 30
mmol/L, cloruro sódico 1,15 mol/L, azida de sodio 0,95 g/L, pH 7,2.C+. Control Positivo ANA-HEp-2: Suero humano con anticuerpos antinucleares
(ANA) patrón homogéneo, azida de sodio 0,95 g/L.

C −. Control Negativo: Suero humano, azida de sodio 0,95 g/L.

D. IgGFITC/Evans: Anticuerpos de cabra anti-inmunoglobulinas IgG humanas conjugados con isotiocianato de fluoresceína (FITC), azul de Evans 0,01 g/L, azida de sodio 0,95 g/L

E. Mounting Medium. Medio deMontaje: Glicerol 78%, fosfato de sodio 6 mmol/L, fosfato de potasio 1,6 mmol/L, cloruro de sodio 60 mmol/L, azida de sodio 0,95 g/L.

F. Papel secante.
Procedimiento:
1. Atemperar los reactivos y lasmuestras a temperatura ambiente.
2. Depositar una gota (25 μL) de la muestra diluida o de los Controles en los pocillos del portaobjetos (A), procurando cubrirlo perfectamente
3. Incubar el portaobjetos encámara húmeda durante 30 minutos a temperatura ambiente (15-30ºC).
4. Eliminar las gotas de las muestras inclinando el portaobjetos y golpeándolo ligeramente. Evitar la mezcla de sueros.
5. Eliminarel suero remanente en el portaobjetos lavándolo con PBS
6. Lavar el portaobjetos sumergiéndolo en una cubeta con PBS durante 5 minutos. Cambiar el PBS y repetir el lavado.
7. Secar cuidadosamente elportaobjetos utilizando el papel secante suministrado. El sustrato debe permanecer siempre húmedo.
8. Depositar una gota de Reactivo D en cada pocillo. Colocar el portaobjetos en una cámara húmeda...