Morfología y crecimiento de células derivadas de tumores

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LICENCIATURA EN BIOLOGÍA
4to SEMESTRE
LABORATORIO DE GENÉTICA
Karen L. Morales Sanginés 21 de mayo de 2010

PRÁCTICA 11: MORFOLOGÍA Y CRECIMIENTO DE CÉLULAS DERIVADAS DE TUMORES

INTRODUCCION
Si bien reconocemos un cáncer y lo etiquetamos por biopsia, como perteneciente a un tipo determinado, los síntomas o signos que dé y su malignidad e incluso la posibilidadde regresión o curación, dependerán principalmente de la localización del tumor y de la respuesta defensiva del propio paciente.
Algunos tumores malignos, histológicamente hablando, se comportan como benignos, desde el punto de vista biológico, como es el caso del cáncer basocelular de la piel. Otros tumores, como el folicular de tiroides, semejan la estructura normal de esa glándula, inclusoen sus metástasis, y sin embrago, son malignos y pueden provocar la muerte a quienes son portadores de ellos. Tumores cerebrales benignos, por su localización intracraneal, pueden ocasionar la muerte del enfermo. Al parecer, las células tumorales no se dividen en forma regular, como lo sugeriría una ecuación matemática, sino que más bien, tienen periodos de inactividad, fenómeno que explica mejorla evolución pausada o rápida que se observa en la clínica.
Modo de diseminación del Cáncer
Una de las características de las neoplasias malignas es la capacidad de crecer, multiplicarse y propagarse fuera del sitio de origen, ya que en estas lesiones primero aparece el crecimiento local y luego la invasión a contigüidad, para dar posteriormente en muchos casos, las llamadas metástasis, que soncrecimientos secundarios a distancia, de un tumor cancerosos. Entonces el avance de un tumor maligno puede hacerse de las siguientes maneras:
a) Invasivas por contigüidad, es la infiltración directa en los tejidos vecinos.
b) Invasión linfática: émbolos de células del tumor salen del sitio original por la corriente linfática y llegan a ganglios y otros órganos.
c) Invasión sanguíneavenosa: embolias venosas tumorales viajan a sitios diversos pasando antes por el pulmón, etc., si no son destruidas por las defensas del organismo, se convierten en metástasis y se implantan en diferentes órganos.
d) Descamación: desprendimiento de células en casos en que, un cáncer rebasa la serosa como el cáncer gástrico y se implantan en el peritoneo, ovarios (tumor de Krumkenber), etc.Un grupo celular neoplásico inicia su crecimiento primario en un tejido determinado, invade e infiltra el tejido circundante hasta que se vasculariza y penetra la luz de los vasos; a partir de ahí, las células tumorales pueden desprenderse e irse como émbolos al corazón, pulmón y otros órganos, donde se adhieren al endotelio vascular, se fijan en el mismo, los extravasan, invaden el tejido de esevaso donde se fijaron, comienzan a proliferar y producen un nuevo tumor.
OBJETIVO
Denotar la replicación de velocidad de células derivadas de tumores y sus múltiples morfologías.

HIPOTESIS
Al realizar un conteo celular de una línea celular derivada de un tumor en diferentes tiempos se podrá observar la velocidad de reproducción de dichas células tumorales.
Debido a las característicasmorfológicas del tipo de célula tumoral en cuestión (NIE115, 293T, COS7), se podrán observar distintas formas: epitelial, neuroblastos o fibroblastos.
METODOLOGIA

De los cubreobjetos con células adheridas, realice tinciones con los colorantes de cada tipo distinto. Observe y reporte la morfología de cada tipo celular.
De las células en cultivo, elimine el medio de cultivo al verter labotella. La mayoría de las células quedaron pegadas en la base de la botella, despréndalas mecánicamente por la adición de 3 ml de PBS 1x. Una vez desprendidas, coloque dicha suspensión en un tubo falcon y centrifugue 5 minutos a 1000 rpm. A la pastilla resultante, resuspéndala en 1 ml de PBS 1x.
Tome 10 μl de la suspensión celular, y mézclelo con 10 μl de azul tripano y 80 μl de PBS 1x. De dicha...