Movilidad electromoferica e inmunoelectroferica

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  • Publicado : 5 de marzo de 2011
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Principales aminoácidos responsables de la carga neta de una proteína, dependiendo del pH.
En los soportes no restrictivos (en los que el entramado no interfiere en la migración, ya que el tamaño delas proteínas es muy pequeño en
comparación con el tamaño de poro del soporte), la separación depende de la densidad de carga de las moléculas y, así, cuanto mayor sea la
densidad, mayor será lavelocidad de migración en un campo eléctrico hacia el polo que determine su carga neta.
La primera etapa del proceso es la aplicación de la muestra. En papel o acetato de celulosa, esto se puedeefectuar de forma puntual (permite el
análisis de varias muestras simultáneamente en pequeñas cantidades) o longitudinalmente (permite el estudio de una sola muestra pero en mayor
cantidad). La muestra seaplica disuelta en el tampón de electroforesis, del que está impregnado el soporte y que se encuentra en los reservorios de
la cubeta, y se deposita en una pequeña zona, lo más estrecha posible, enel centro o en un extremo del soporte (si se conoce cuál va a ser la
dirección de desplazamiento de la misma) y de forma perpendicular a la dirección del campo eléctrico. Conviene evitar laproximidad de los bordes
del papel, ya que allí el campo eléctrico no es homogéneo y se distorsionan las bandas según avanzan. El volumen que se aplica suele ser inferior a
10 μL y si se necesitan mayoresvolúmenes porque la muestra se encuentre muy diluida, pueden hacerse aplicaciones sucesivas sobre la misma
zona, dejando secar entre aplicación y aplicación. Es necesario humedecer el soporte (papel oacetato de celulosa) para que sea conductor; para
ello, se impregna el soporte de tampón de electroforesis por ambos extremos y de forma simultánea para que por capilaridad se desplace hacia la
zonade aplicación de la muestra.
En los geles de agarosa, se perfora el gel con ayuda de un troquel o una pipeta de diámetro adecuado y se elimina esa porción por succión. La
perforación puede ser...
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