Mutaciones Bovinos

Páginas: 6 (1366 palabras) Publicado: 25 de noviembre de 2012
UNIVERSIDAD IBEROAMERICANA DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍA Facultad de Ciencias,

TRABAJO PRÁCTICO Nº18 ELECTROFORESIS Esta técnica se basa en la capacidad de las macromoléculas cargadas para desplazarse en un campo eléctrico, con velocidad proporcional a su carga e inversamente proporcional a su tamaño. Los ácidos nucleicos ya disponen de una carga eléctrica negativa, que los dirigirá al polopositivo, mientras que las proteínas se cargan al unirse con sustancias como el SDS (detergente) que incorpora cargas negativas de una manera dependiente de la masa molecular de la proteína.Los dos principales polímeros que se utilizan para la técnica de electroforesis son la agarosa (para ADN o ARN) y la poliacrilamida (para proteínas).

Análisis de ADN en geles de Agarosa La electroforesis de ADN sepuede realizar en geles de agarosa horizontal (el más común) O vertical. El equipo consta de un contenedor para el buffer de corrida con los dos electrodos para la corriente eléctrica, un molde para la formación del gel y “peines” de varios grosores para formar las aberturas en donde se colocan las muestras (Figura 1).

Figura 1. Esquema de una cámara de electroforesis para geles de agarosa. A.Contenedor del buffer de corrida. B. Molde para elaborar el gel de agarosa. C. detalle del peine para la formación de las aberturas.

Guía de Laboratorio, Biología Molecular Pedagogía 2010 Departamento de Biología

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La migración de un fragmento de ADN en los geles de agarosa depende de varios parámetros: Eltamaño del fragmento: las moléculas lineales de ADN de doble cadena se desplazan en los geles de agarosa de una manera inversamente proporcional al log10 de sus pesos moleculares. La concentración de la agarosa: los fragmentos de ADN tienen diferente migración dependiendo de la concentración de la agarosa. La conformación del ADN. Las moléculas circulares y las lineales presentan diferencias en sumigración a través de la matriz de agarosa. La corriente aplicada. A voltajes bajos la migración de las moléculas lineales de ADN es proporcional al voltaje aplicado. Si la fuerza del campo es elevada la movilidad de los fragmentos de alto peso molecular se incrementa diferencialmente.

Soluciones de Corrida Existen varios amortiguadores para la corrida del gel, los cuales pueden ser preparados ensoluciones concentradas y guardadas a temperatura ambiente. Las más comúnmente usadas son: Tabla 1. Soluciones de corrida utilizadas con más frecuencia en electroforesis con geles de agarosa Buffer Tris-acetato (TAE) Solución de trabajo 0.04 M Tris-acetato 0.01M EDTA Solución concentrada/lt (50X) 242 g Tris base 57.1 ml Ácido acético glacial 100 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0) Tris-fosfato (TPE) 0.08 MTris-fosfato 0.1 M EDTA (10X) 108 g Tris base 15.5 ml de ácido fosfórico al 85%, 40 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0) Tris-borato (TBE) 0.089 M Tris-borato 0.89 M Ácido bórico 0.002 M EDTA
Guía de Laboratorio, Biología Molecular Pedagogía 2010 Departamento de Biología

(5X) 54 g Tris base 27.5 g de ácido bórico 20 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0)
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Trabajo práctico en el laboratorio

1. Preparación del Buffer de electroforesis (Ver tabla 1). TBE (1X) será utilizado como buffer de corrida. Prepare mínimo 300 ml. 2. Preparación del gel de agarosa. Prepare un gel de agarosa al 1% (para un volumen de 30 ml). Pese la agarosa, adicione 30 ml de buffer TBE 1X y caliente. Déjelo enfriar y viértalo sobre la cama para el gel y posicionelos peines.

3. Posicionamiento del gel . Cuando el gel haya solidificado, ubíquelo sobre la cámara con los posos de siembra hacia arriba. Adicione el buffer de corrida (T.B.E 1X) lo suficiente para cubrir el gel a una profundidad de 1cm. Nota: es importante usar el

mismo lote de buffer de electroforesis en la cámara de electroforesis que en la preparación del gel. Pequeñas diferencias en la...
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