Nepes al 100
Páginas: 8 (1820 palabras)
Publicado: 18 de noviembre de 2010
Materiales y Métodos
Aislamiento, identificación y preservación del microorganismo
El microorganismo fue aislado de pozos de aceite en el sur de Iran. El método de diluciones seriadas de muestra y el recuento de placa en medio selectivo, Agar Cetrimida, fueron usados para el aislamiento. Las placas fueron incubadas a 30ºc por 48 horas.
Inóculo
La cepa fue activada sobre TSA, incubada a 30º Cpor 48 horas y transferida a un recipiente de vidrio (erlenmeyer) de 250 ml que contenía 50 ml de TSA. Este frasco con medio TSA fue incubado a 30ºC y aislado a 250 rpm durante 20 horas. El cultivo se centrifugo a 6000 rpm durante 20 minutos, el centrifugado de la masa microbial fue suspendido en un medio de cultivo (Medios producción de sal) que tenía la siguiente composición (g/l): 1, (NH4)2SO4, 3 KH2O PO4, 0.2 MgSO4 7 H20, el pH fue ajustado a 7 con una sol de (1N) más 1% v/v de glicerol, en disposición para obtener el inoculo inicial de 0.005, 0.075 y 0.1 g/l, de acuerdo con una curva de calibración de peso seco versus la absorvancia.
Proceso fermentativo
La producción de ramnolipidos fue estudiada durante un período de fermentación de 7 días en el erlenmeyer bajo agitación conun material inicial sembrado estandarizadamente en un medio de cultivo como se menciono previamente, almacenado a una temperatura de 30ºC y agitado en un shaker a 120 rpm, la fuentes de C usadas fueron aceite de parafina, gasolina recolectado de un afluente de pozo en una Isla de Irán, contiene 32 % de hidrocarburo saturado, 23% de aromáticos, 36% de resinas y 9 % asfaltano y glicerol y suero dePAK company. En adición la relación de la fuente de C estudiadas, C/N varia con la siguiente concentración de glicerol, 0,5 ,1,2,3,4, 6 v/v correspondientes a relaciones C/N de 20, 40 , 60 ,80 ,100, 120. Para la evalución de la fuente de nitrógeno más apropiada la producción biosufactantes se emplearon, NaNO3 (NH4)2 SO4 y CH4 N2Oa la siguiente concentración; 1,45, 1,0 Y 0,51 g/l y glicerol 3% v/v.Concentración de biomasa
El crecimiento bacterial fue monitoreado por medición de absorvancia a una longitud de onda de 610 nm, las muestras de 50 ml fueron removidas de los frascos en intervalos regulares y se centrifugaron a 6000 rpm durante 15 min, las celdas centrifugas se suspendieron en 5 ml de H2O destilada y la biomasa expresada en peso seco g/l, fue obtenida de una curva decalibración.
Cuantificación de ramnosa y glicerol
La cuantificación de rhamnolípidos expresado en ramnosa (g / l) se midió en una celda libre de medio de cultivo, utilizando el método de fenol, ácido sulfúrico (Itoh,, et al., 1971 y Kappeli y Finnerty, 1980). El Glicerol se evaluó mediante el método enzimático-colorimétricaspara la evaluación de contenido de triglicéridos
Determinación de laconcentración micelar crítica (CMC)
La tensión superficial del biosurfactante fue medido por el método del anillo (12) usando un tensiómetro (Cole-co instrumento Parmer,Bunker, IL, U.S.A) en la habitación de temperatura. La concentración a partir de la cual comenzó el micelio se representa como CMC. En el CMC se observaron cambios súbitos en la tensión superficial, la conductividad eléctrica y laconcentración biosurfactante, El CMC se determinan mediante la representación de la tensión superficial en función de la concentración biosurfactante, la tensión superficial en este punto fue designado como γ CMC (Holdom y Turner, 1969 y Itoh y Suzuki, 1972).
Resultados
Microbiana aislamiento, identificación y conservación
Esta cepa mostró la capacidad de uso del carbono de fuentes como;fructosa, glucosa, manitol, ácido manosa, glicerol, ácido láctico, que se conocidas como buenas fuentes de carbono para la producción de rhamnolípidos, (Finnerty and Singer, 1983; Guerra-Santos, et al., 1983; Hisatsuka, et al., 1977).
Efecto de la fuente de carbono
La producción de rhamnolípidos por Pseudomonas aeruginosa, utilizando como gasoline, aceite de parafina, suero de leche y glicerol,...
Aislamiento, identificación y preservación del microorganismo
El microorganismo fue aislado de pozos de aceite en el sur de Iran. El método de diluciones seriadas de muestra y el recuento de placa en medio selectivo, Agar Cetrimida, fueron usados para el aislamiento. Las placas fueron incubadas a 30ºc por 48 horas.
Inóculo
La cepa fue activada sobre TSA, incubada a 30º Cpor 48 horas y transferida a un recipiente de vidrio (erlenmeyer) de 250 ml que contenía 50 ml de TSA. Este frasco con medio TSA fue incubado a 30ºC y aislado a 250 rpm durante 20 horas. El cultivo se centrifugo a 6000 rpm durante 20 minutos, el centrifugado de la masa microbial fue suspendido en un medio de cultivo (Medios producción de sal) que tenía la siguiente composición (g/l): 1, (NH4)2SO4, 3 KH2O PO4, 0.2 MgSO4 7 H20, el pH fue ajustado a 7 con una sol de (1N) más 1% v/v de glicerol, en disposición para obtener el inoculo inicial de 0.005, 0.075 y 0.1 g/l, de acuerdo con una curva de calibración de peso seco versus la absorvancia.
Proceso fermentativo
La producción de ramnolipidos fue estudiada durante un período de fermentación de 7 días en el erlenmeyer bajo agitación conun material inicial sembrado estandarizadamente en un medio de cultivo como se menciono previamente, almacenado a una temperatura de 30ºC y agitado en un shaker a 120 rpm, la fuentes de C usadas fueron aceite de parafina, gasolina recolectado de un afluente de pozo en una Isla de Irán, contiene 32 % de hidrocarburo saturado, 23% de aromáticos, 36% de resinas y 9 % asfaltano y glicerol y suero dePAK company. En adición la relación de la fuente de C estudiadas, C/N varia con la siguiente concentración de glicerol, 0,5 ,1,2,3,4, 6 v/v correspondientes a relaciones C/N de 20, 40 , 60 ,80 ,100, 120. Para la evalución de la fuente de nitrógeno más apropiada la producción biosufactantes se emplearon, NaNO3 (NH4)2 SO4 y CH4 N2Oa la siguiente concentración; 1,45, 1,0 Y 0,51 g/l y glicerol 3% v/v.Concentración de biomasa
El crecimiento bacterial fue monitoreado por medición de absorvancia a una longitud de onda de 610 nm, las muestras de 50 ml fueron removidas de los frascos en intervalos regulares y se centrifugaron a 6000 rpm durante 15 min, las celdas centrifugas se suspendieron en 5 ml de H2O destilada y la biomasa expresada en peso seco g/l, fue obtenida de una curva decalibración.
Cuantificación de ramnosa y glicerol
La cuantificación de rhamnolípidos expresado en ramnosa (g / l) se midió en una celda libre de medio de cultivo, utilizando el método de fenol, ácido sulfúrico (Itoh,, et al., 1971 y Kappeli y Finnerty, 1980). El Glicerol se evaluó mediante el método enzimático-colorimétricaspara la evaluación de contenido de triglicéridos
Determinación de laconcentración micelar crítica (CMC)
La tensión superficial del biosurfactante fue medido por el método del anillo (12) usando un tensiómetro (Cole-co instrumento Parmer,Bunker, IL, U.S.A) en la habitación de temperatura. La concentración a partir de la cual comenzó el micelio se representa como CMC. En el CMC se observaron cambios súbitos en la tensión superficial, la conductividad eléctrica y laconcentración biosurfactante, El CMC se determinan mediante la representación de la tensión superficial en función de la concentración biosurfactante, la tensión superficial en este punto fue designado como γ CMC (Holdom y Turner, 1969 y Itoh y Suzuki, 1972).
Resultados
Microbiana aislamiento, identificación y conservación
Esta cepa mostró la capacidad de uso del carbono de fuentes como;fructosa, glucosa, manitol, ácido manosa, glicerol, ácido láctico, que se conocidas como buenas fuentes de carbono para la producción de rhamnolípidos, (Finnerty and Singer, 1983; Guerra-Santos, et al., 1983; Hisatsuka, et al., 1977).
Efecto de la fuente de carbono
La producción de rhamnolípidos por Pseudomonas aeruginosa, utilizando como gasoline, aceite de parafina, suero de leche y glicerol,...
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