Norma Para Aminas Biogenas
Páginas: 8 (1893 palabras)
Publicado: 27 de diciembre de 2012
amibAS (HISTAMINA) Método HPLC Sección Química de Alimentos y Nutrición PRT-711.04-070
Fecha emisión: 2002 Revisión: 2 Fecha revisión: 21-07-2011 Página 1 de 7
1.
OBJETIVO
Determinar histamina y otras aminas biógenas por HPLC con detector UV. 2. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE
El método es aplicable a los alimentos sospechosos de contener histaminas y otras aminas biógenas,principalmente productos hidrobiológicos frescos o procesados, harina de pescado, quesos y cecinas, recepcionados en la Sección Química de Alimentos. 3. FUNDAMENTO
Extracción de aminas biógenas en ácido tricloroacético, derivatización precolumna mediante cloruro de dansilo y posterior análisis de los respectivos derivados dansilados por HPLC con detector UV. 4. REFERENCIAS
Norma Chilena NCh 2637.Of2001 Productos hidrobiológicos “Determinación de histamina y otras aminas biógenas”- Método HPLC con detector UV. 5. 5.1 TERMINOLOGÍA Aminas biógenas: compuestos alergénicos generados por la degradación de aminoácidos que están contenidos en pescados y otros alimentos como derivados lácteos, cecinas, hígado de vacuno y ave, cacao, vinos y cerveza, los que al ser consumidos pueden causar reaccionesalérgicas o cuadros de intoxicación. HPLC : Cromatografía líquida de alta resolución
5.2
6.
MATERIALES INSUMOS Y EQUIPOS
6.1 MATERIALES Y EQUIPOS Antes de comenzar a trabajar con las muestras, asegurarse de que todo lo mencionado a continuación esté disponible e idealmente disponer de los materiales en el mesón de trabajo: 6.1.1 6.1.2 6.1.3 6.1.4 Equipo HPLC con detector UV de longitudde onda variable. Balanza analítica 0.0001 g. Balanza de precisión 0.01 g Agitador mecánico de tubos
DETERMINACIÓN DE AMINAS BIOGENAS (HISTAMINA) Método HPLC Sección Química de Alimentos y Nutrición 6.1.5 6.1.6 6.1.7 6.1.8 6.1.9 Baño termorregulado a 60 °C Centrífuga 2000 a 3000 rpm Tubos de centrífuga con tapa rosca de 50 mL Micropipetas de 100 – 1000 µL Papel filtro Whatman N° 1, 4 oequivalente PRT-711.04-070
Fecha emisión: 2002 Revisión: 2 Fecha revisión: 21-07-2011 Página 2 de 7
6.1.10 Filtros de membrana de 0.22 µm 6.1.11 Viales con tapa de 2 a 3 mL 6.1.12 Columna C-18 fase reversa, 125-4 (5 µm) o equivalente 6.1.13 Equipo de filtración con filtro de membrana de 0.45 µm 6.2 REACTIVOS
Antes de comenzar a trabajar con las muestras, asegurarse de que todo lo mencionado acontinuación esté disponible e idealmente disponer de los materiales en el mesón de trabajo: 6.2.1 6.2.2 6.2.3 6.2.4 Acetona p.a. Solución de bicarbonato de sodio 0.25 M (PM=84). Pesar 5.25 g de NaHCO3 y llevar a un matraz de 250 mL, aforando con agua desionizada filtrada. Cloruro de dansilo 10 mg/mL. Pesar 50 mg de cloruro de dansilo y llevar a un matraz de 5 mL aforando con acetona p.a. Guardarrefrigerado en envase ámbar bien cerrado. Solución de ácido tricloroacético (TCA) al 5% con estándar interno de efedrina 250 ppm. Pesar 25 g de TCA en un matraz aforado de 500 mL, agregar 0.125 g de efedrina p.a. y aforar con agua para análisis. Fase móvil: metanol HPLC y agua desionizada y filtrada (se usa gradiente). Estándares: Aminas biógenas: Putrecina Cadaverina Tiramina HistaminaEspermidina.
6.2.5 6.2.6
6.2.6.1
Preparar una solución patrón de 1000 mg/L de cada una de las aminas biógenas: Pesar 50 mg de cada una y aforar a 50 mL con solución de TCA 5% con estándar interno.
DETERMINACIÓN DE AMINAS BIOGENAS (HISTAMINA) Método HPLC Sección Química de Alimentos y Nutrición 6.2.6.2 PRT-711.04-070
Fecha emisión: 2002 Revisión: 2 Fecha revisión: 21-07-2011 Página 3 de 7Preparar a partir de las soluciones patrones, una mezcla que contenga al menos 3 niveles desde 50 a 500 ug/mL para la curva de calibración. Aforar cada vez con TCA 5% con estándar interno.
7.
DESARROLLO
Antes de comenzar a trabajar con las muestras, asegurarse de que todo lo mencionado en punto materiales, insumos y reactivos esté disponible. A continuación se describe el método...
Fecha emisión: 2002 Revisión: 2 Fecha revisión: 21-07-2011 Página 1 de 7
1.
OBJETIVO
Determinar histamina y otras aminas biógenas por HPLC con detector UV. 2. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE
El método es aplicable a los alimentos sospechosos de contener histaminas y otras aminas biógenas,principalmente productos hidrobiológicos frescos o procesados, harina de pescado, quesos y cecinas, recepcionados en la Sección Química de Alimentos. 3. FUNDAMENTO
Extracción de aminas biógenas en ácido tricloroacético, derivatización precolumna mediante cloruro de dansilo y posterior análisis de los respectivos derivados dansilados por HPLC con detector UV. 4. REFERENCIAS
Norma Chilena NCh 2637.Of2001 Productos hidrobiológicos “Determinación de histamina y otras aminas biógenas”- Método HPLC con detector UV. 5. 5.1 TERMINOLOGÍA Aminas biógenas: compuestos alergénicos generados por la degradación de aminoácidos que están contenidos en pescados y otros alimentos como derivados lácteos, cecinas, hígado de vacuno y ave, cacao, vinos y cerveza, los que al ser consumidos pueden causar reaccionesalérgicas o cuadros de intoxicación. HPLC : Cromatografía líquida de alta resolución
5.2
6.
MATERIALES INSUMOS Y EQUIPOS
6.1 MATERIALES Y EQUIPOS Antes de comenzar a trabajar con las muestras, asegurarse de que todo lo mencionado a continuación esté disponible e idealmente disponer de los materiales en el mesón de trabajo: 6.1.1 6.1.2 6.1.3 6.1.4 Equipo HPLC con detector UV de longitudde onda variable. Balanza analítica 0.0001 g. Balanza de precisión 0.01 g Agitador mecánico de tubos
DETERMINACIÓN DE AMINAS BIOGENAS (HISTAMINA) Método HPLC Sección Química de Alimentos y Nutrición 6.1.5 6.1.6 6.1.7 6.1.8 6.1.9 Baño termorregulado a 60 °C Centrífuga 2000 a 3000 rpm Tubos de centrífuga con tapa rosca de 50 mL Micropipetas de 100 – 1000 µL Papel filtro Whatman N° 1, 4 oequivalente PRT-711.04-070
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6.1.10 Filtros de membrana de 0.22 µm 6.1.11 Viales con tapa de 2 a 3 mL 6.1.12 Columna C-18 fase reversa, 125-4 (5 µm) o equivalente 6.1.13 Equipo de filtración con filtro de membrana de 0.45 µm 6.2 REACTIVOS
Antes de comenzar a trabajar con las muestras, asegurarse de que todo lo mencionado acontinuación esté disponible e idealmente disponer de los materiales en el mesón de trabajo: 6.2.1 6.2.2 6.2.3 6.2.4 Acetona p.a. Solución de bicarbonato de sodio 0.25 M (PM=84). Pesar 5.25 g de NaHCO3 y llevar a un matraz de 250 mL, aforando con agua desionizada filtrada. Cloruro de dansilo 10 mg/mL. Pesar 50 mg de cloruro de dansilo y llevar a un matraz de 5 mL aforando con acetona p.a. Guardarrefrigerado en envase ámbar bien cerrado. Solución de ácido tricloroacético (TCA) al 5% con estándar interno de efedrina 250 ppm. Pesar 25 g de TCA en un matraz aforado de 500 mL, agregar 0.125 g de efedrina p.a. y aforar con agua para análisis. Fase móvil: metanol HPLC y agua desionizada y filtrada (se usa gradiente). Estándares: Aminas biógenas: Putrecina Cadaverina Tiramina HistaminaEspermidina.
6.2.5 6.2.6
6.2.6.1
Preparar una solución patrón de 1000 mg/L de cada una de las aminas biógenas: Pesar 50 mg de cada una y aforar a 50 mL con solución de TCA 5% con estándar interno.
DETERMINACIÓN DE AMINAS BIOGENAS (HISTAMINA) Método HPLC Sección Química de Alimentos y Nutrición 6.2.6.2 PRT-711.04-070
Fecha emisión: 2002 Revisión: 2 Fecha revisión: 21-07-2011 Página 3 de 7Preparar a partir de las soluciones patrones, una mezcla que contenga al menos 3 niveles desde 50 a 500 ug/mL para la curva de calibración. Aforar cada vez con TCA 5% con estándar interno.
7.
DESARROLLO
Antes de comenzar a trabajar con las muestras, asegurarse de que todo lo mencionado en punto materiales, insumos y reactivos esté disponible. A continuación se describe el método...
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