Obttencion DNA Higado 1
Páginas: 15 (3655 palabras)
Publicado: 11 de julio de 2015
Introducción
El ácido desoxirribonucleico, abreviado como ADN, es un ácido nucleico que contiene instrucciones genéticas usadas en el desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos conocidos y algunos virus, y es responsable de su transmisión hereditaria, es una molécula única en cada organismo.
El DNA está formando una doble hélice. Los nucleótidos están integrados por una azúcar(desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada (adenina, guanina, timina o citosina). La unión de los nucleótidos ocurre entre el grupo fosfato y el azúcar, mediante enlaces fosfodiéster, dando lugar al esqueleto de la molécula. Las bases de cadenas opuestas se unen mediante puentes de hidrógeno y mantienen estable la estructura helicoidal.
Los grupos fosfato están cargados negativamentey son polares, lo que le confiere al DNA una carga neta negativa y lo hace altamente polar, características que son aprovechadas para su extracción.
En 1963 Watson y Crick dilucidaron la estructura de la molécula del DNA como una doble héliceconstituida por dos cadenas de nucleótidos unidas entre sí, la construcción del modelo que propusieron fue de acuerdo a los siguientes puntos:
1.- Ladifracción de rayos X muestra que el ADN tiene una forma de hélice regular, teniendo una vuelta casa 34 Å (3.4 nm) con un diámetro de aproximadamente 20 Å (2 nm). De acuerdo a lo anterior, debe tener 10 nucleótidos por vuelta.
2.- La densidad del ADN sugiere que la hélice debe contener cadenas de polinucleótidos. El diámetro constante de la hélice puede ser explicado si las bases de cada cara dela cadena están hacia adentro y están restringidas de tal manera que las purinas están siempre opuestas a las pirimidinas, evitando así los pares purina-purina o pirimidina-pirimidina.
3.- La proporción de G es siempre la misma que la de C en el ADN y las proporciones de A son siempre las mismas que las de T.
Dado que en el ADN la adenina se empareja sólo con la timina y la citosina sólo con laguanina, cada cadena del ADN puede ser empleada como molde para fabricar su complementaria.
El modelo requiere las dos cadenas de polinucléotidos corriendo en direcciones (antiparalelas). Al observar la hélice, se aprecia que una hebra corre en dirección 5´,3´, mientras que su hebra complementaria lo hace en dirección 3´ , 5´. Esto se refiere al enlace que se forma entre el grupo fosfato enposición 3´ de un nucleótido y el grupo hidroxilo 5´ en el siguiente nucleótido, de tal forma que en los extremos se encuentra un grupo3’ libre de un lado y uno 5´ del otro.
El análisis de la molécula de DNA constituye una herramienta muy valiosa que ha permitido delinear estrategias aplicadas a la investigación básica y al diagnóstico de innumerables entidades de origen genético.
El DNA puedeser extraído de muchos tipos de materiales biológicos y el éxito del análisis molecular depende de su adecuado aislamiento en términos de cantidad, calidad y pureza, es necesario separar el DNA del resto de los componentes celulares así como del material no biológico que pueda estar presente.
La extracción consiste en el aislamiento y purificación de moléculas de DNA y se basa en las característicasfisicoquímicas de la molécula.
Los grupos fosfato tienen una alta tendencia a repelerse, debido a su carga negativa, lo que permite disolver al DNA en soluciones acuosas y formar una capa hidratante alrededor de la molécula. Pero, en presencia de etanol, se rompe la capa hidratante y quedan expuestos los grupos fosfatos. Bajo estas condiciones se favorece la unión con cationes como Na+ quereducen las fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucleótidos y permiten que el DNA precipite. Por otro lado, la carga neta negativa del DNA le permite unirse a moléculas y matrices inorgánicas cargadas positivamente.
La estimación de la concentración de DNA se puede llevar acabo utilizando un espectrofotómetro de luz ultravioleta a una longitud de onda de 260 y 280 nm. La lectura a 260 permite...
El ácido desoxirribonucleico, abreviado como ADN, es un ácido nucleico que contiene instrucciones genéticas usadas en el desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos conocidos y algunos virus, y es responsable de su transmisión hereditaria, es una molécula única en cada organismo.
El DNA está formando una doble hélice. Los nucleótidos están integrados por una azúcar(desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada (adenina, guanina, timina o citosina). La unión de los nucleótidos ocurre entre el grupo fosfato y el azúcar, mediante enlaces fosfodiéster, dando lugar al esqueleto de la molécula. Las bases de cadenas opuestas se unen mediante puentes de hidrógeno y mantienen estable la estructura helicoidal.
Los grupos fosfato están cargados negativamentey son polares, lo que le confiere al DNA una carga neta negativa y lo hace altamente polar, características que son aprovechadas para su extracción.
En 1963 Watson y Crick dilucidaron la estructura de la molécula del DNA como una doble héliceconstituida por dos cadenas de nucleótidos unidas entre sí, la construcción del modelo que propusieron fue de acuerdo a los siguientes puntos:
1.- Ladifracción de rayos X muestra que el ADN tiene una forma de hélice regular, teniendo una vuelta casa 34 Å (3.4 nm) con un diámetro de aproximadamente 20 Å (2 nm). De acuerdo a lo anterior, debe tener 10 nucleótidos por vuelta.
2.- La densidad del ADN sugiere que la hélice debe contener cadenas de polinucleótidos. El diámetro constante de la hélice puede ser explicado si las bases de cada cara dela cadena están hacia adentro y están restringidas de tal manera que las purinas están siempre opuestas a las pirimidinas, evitando así los pares purina-purina o pirimidina-pirimidina.
3.- La proporción de G es siempre la misma que la de C en el ADN y las proporciones de A son siempre las mismas que las de T.
Dado que en el ADN la adenina se empareja sólo con la timina y la citosina sólo con laguanina, cada cadena del ADN puede ser empleada como molde para fabricar su complementaria.
El modelo requiere las dos cadenas de polinucléotidos corriendo en direcciones (antiparalelas). Al observar la hélice, se aprecia que una hebra corre en dirección 5´,3´, mientras que su hebra complementaria lo hace en dirección 3´ , 5´. Esto se refiere al enlace que se forma entre el grupo fosfato enposición 3´ de un nucleótido y el grupo hidroxilo 5´ en el siguiente nucleótido, de tal forma que en los extremos se encuentra un grupo3’ libre de un lado y uno 5´ del otro.
El análisis de la molécula de DNA constituye una herramienta muy valiosa que ha permitido delinear estrategias aplicadas a la investigación básica y al diagnóstico de innumerables entidades de origen genético.
El DNA puedeser extraído de muchos tipos de materiales biológicos y el éxito del análisis molecular depende de su adecuado aislamiento en términos de cantidad, calidad y pureza, es necesario separar el DNA del resto de los componentes celulares así como del material no biológico que pueda estar presente.
La extracción consiste en el aislamiento y purificación de moléculas de DNA y se basa en las característicasfisicoquímicas de la molécula.
Los grupos fosfato tienen una alta tendencia a repelerse, debido a su carga negativa, lo que permite disolver al DNA en soluciones acuosas y formar una capa hidratante alrededor de la molécula. Pero, en presencia de etanol, se rompe la capa hidratante y quedan expuestos los grupos fosfatos. Bajo estas condiciones se favorece la unión con cationes como Na+ quereducen las fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucleótidos y permiten que el DNA precipite. Por otro lado, la carga neta negativa del DNA le permite unirse a moléculas y matrices inorgánicas cargadas positivamente.
La estimación de la concentración de DNA se puede llevar acabo utilizando un espectrofotómetro de luz ultravioleta a una longitud de onda de 260 y 280 nm. La lectura a 260 permite...
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