Operon Ara
Páginas: 3 (644 palabras)
Publicado: 18 de febrero de 2013
Inducción del operón ara
Resultados:
En 12 tubos con medio de cultivo con inoculo de cepas de E. coli con el plásmido pGLO y diferentes concentraciones de arabinosa (inductor) y glucosa(represor) con ampicilina como marcador de selección se observó si había expresión de GFP exponiéndolas a luz UV en banda A (365-465) siendo los tubos con fluorescencia los que contienen células queexpresan esta proteína.
En la siguiente tabla se pueden observar los resultados obtenidos:
|1 |2 |3 |4 |5 |6 |7 |8 |9 |10 |11 |12 | |Expresión |- |- |+ |++ |++ |+++ |+ |+* |+ |+ |+ |- | |Amp(μg/ml) |0|100 |0 |100 |100 |100 |100 |100 |100 |100 |100 |100 | |Arabinosa (%) |0 |0 |0.25 |0.25 |0.12 |0.06 |0.03 |0.25 |0.25 |0.25 |0.25 |0 | |Glucosa (%) |0 |0 |0 |0 |0 |0 |0 |0.25 |0.12 |0.06 |0.03 |0.25 || | | | | | | | | | | | | | |+++ =mucha intensidad de fluorescencia ++ =moderada fluorescencia, + =poca fluorescencia, - =nula fluorescencia
* =muy poca fluorescenciaResultados en presencia de luz UV
Discusión
El plásmido pGLO aparte del gen de GFP contiene otros 2, el araC que codifica para laproteína activadora AraC y el gen bla que codifica para una enzima de beta-lactamasa que confiere resistencia a la ampicilina (1). La expresión de GFP en células con plásmido pGLO esta bajo el controldel promotor PBAD que normalmente se utiliza para transcribir el operón ara, el promotor solo es funcional si AraC esta unido a una secuencia activadora(araI) y esta unión solo es posible con lapresencia de arabinosa(inductor)(1). Otro factor para que se realice la transcripción es que el complejo cAMP-CAP se una a una secuencia cercana a araI(CBS) pero la síntesis de cAMP es inhibida por laglucosa, por lo que en presencia de glucosa(inhibidor) no hay complejos para la unión y por ende, no hay transcripción(1).
Los tubos 1 y 2 no contenían ningún azúcar y no presentaron fluorescencia...
Resultados:
En 12 tubos con medio de cultivo con inoculo de cepas de E. coli con el plásmido pGLO y diferentes concentraciones de arabinosa (inductor) y glucosa(represor) con ampicilina como marcador de selección se observó si había expresión de GFP exponiéndolas a luz UV en banda A (365-465) siendo los tubos con fluorescencia los que contienen células queexpresan esta proteína.
En la siguiente tabla se pueden observar los resultados obtenidos:
|1 |2 |3 |4 |5 |6 |7 |8 |9 |10 |11 |12 | |Expresión |- |- |+ |++ |++ |+++ |+ |+* |+ |+ |+ |- | |Amp(μg/ml) |0|100 |0 |100 |100 |100 |100 |100 |100 |100 |100 |100 | |Arabinosa (%) |0 |0 |0.25 |0.25 |0.12 |0.06 |0.03 |0.25 |0.25 |0.25 |0.25 |0 | |Glucosa (%) |0 |0 |0 |0 |0 |0 |0 |0.25 |0.12 |0.06 |0.03 |0.25 || | | | | | | | | | | | | | |+++ =mucha intensidad de fluorescencia ++ =moderada fluorescencia, + =poca fluorescencia, - =nula fluorescencia
* =muy poca fluorescenciaResultados en presencia de luz UV
Discusión
El plásmido pGLO aparte del gen de GFP contiene otros 2, el araC que codifica para laproteína activadora AraC y el gen bla que codifica para una enzima de beta-lactamasa que confiere resistencia a la ampicilina (1). La expresión de GFP en células con plásmido pGLO esta bajo el controldel promotor PBAD que normalmente se utiliza para transcribir el operón ara, el promotor solo es funcional si AraC esta unido a una secuencia activadora(araI) y esta unión solo es posible con lapresencia de arabinosa(inductor)(1). Otro factor para que se realice la transcripción es que el complejo cAMP-CAP se una a una secuencia cercana a araI(CBS) pero la síntesis de cAMP es inhibida por laglucosa, por lo que en presencia de glucosa(inhibidor) no hay complejos para la unión y por ende, no hay transcripción(1).
Los tubos 1 y 2 no contenían ningún azúcar y no presentaron fluorescencia...
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