Phage Display
Páginas: 2 (454 palabras)
Publicado: 21 de mayo de 2012
Phage Display. Materia: Inmunotecnología.
Los fagos son utilizados para almacenar bibliotecas de proteínas, péptidos o anticuerpos. Los genes de interés son insertados en el genoma del fago,específicamente en la zona que codifica para las proteínas de la cápside viral. El gen de interés por lo general se inserta en la zona del gen p-VIII o en el gen p-III, y al momento de que los fagos sereproducen en el interior de una célula, por ejemplo E. Coli, los fagos expresan en su cápside una de las proteínas de la biblioteca. En el caso de los anticuerpos, solo se expresa la región Fab.
Latécnica del Phage Display nos permite distinguir y seleccionar una proteína específica de la biblioteca expresada en los fagos. Los diferentes fagos de la biblioteca son incubados in-vitro contra unasuperficie que contenga un antígeno, un anticuerpo o alguna proteína que tenga gran afinidad por la proteína de interés. De esta manera los fagos que poseen nuestra proteína se van a adherir al antígeno,y quedaran fijados en la placa o el tubo de ensayo. El resto de fagos deberán ser eliminados en lavados sucesivos. Una vez que el fago con la proteína de interés sea purificado se usara para infectarun cultivo celular de E. Coli y poder reproducir la proteína.
1.- Inserción de genes en fagos y generación de una biblioteca de proteínas.
2.- Selección de proteína de interés y lavados parapurificar.
3.- Amplificación del fago con la proteína en E. Coli.
1.- Inserción de genes en fagos y generación de una biblioteca de proteínas.
2.- Selección de proteína de interés y lavados parapurificar.
3.- Amplificación del fago con la proteína en E. Coli.
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El tipo de fago mas utilizado por esta técnica son los fagos filamentosos. Poseen diferentes proteínas queconforman su cápside, la cual encierra su genoma en forma de cadena simple. La proteína mas abundante en la cápside es la p-VIII, de la cuál hay 2700 copias. Este tipo de fago infecta cepas de E. Coli...
Los fagos son utilizados para almacenar bibliotecas de proteínas, péptidos o anticuerpos. Los genes de interés son insertados en el genoma del fago,específicamente en la zona que codifica para las proteínas de la cápside viral. El gen de interés por lo general se inserta en la zona del gen p-VIII o en el gen p-III, y al momento de que los fagos sereproducen en el interior de una célula, por ejemplo E. Coli, los fagos expresan en su cápside una de las proteínas de la biblioteca. En el caso de los anticuerpos, solo se expresa la región Fab.
Latécnica del Phage Display nos permite distinguir y seleccionar una proteína específica de la biblioteca expresada en los fagos. Los diferentes fagos de la biblioteca son incubados in-vitro contra unasuperficie que contenga un antígeno, un anticuerpo o alguna proteína que tenga gran afinidad por la proteína de interés. De esta manera los fagos que poseen nuestra proteína se van a adherir al antígeno,y quedaran fijados en la placa o el tubo de ensayo. El resto de fagos deberán ser eliminados en lavados sucesivos. Una vez que el fago con la proteína de interés sea purificado se usara para infectarun cultivo celular de E. Coli y poder reproducir la proteína.
1.- Inserción de genes en fagos y generación de una biblioteca de proteínas.
2.- Selección de proteína de interés y lavados parapurificar.
3.- Amplificación del fago con la proteína en E. Coli.
1.- Inserción de genes en fagos y generación de una biblioteca de proteínas.
2.- Selección de proteína de interés y lavados parapurificar.
3.- Amplificación del fago con la proteína en E. Coli.
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El tipo de fago mas utilizado por esta técnica son los fagos filamentosos. Poseen diferentes proteínas queconforman su cápside, la cual encierra su genoma en forma de cadena simple. La proteína mas abundante en la cápside es la p-VIII, de la cuál hay 2700 copias. Este tipo de fago infecta cepas de E. Coli...
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