ppt transcriptasa inversa

Experimento Clásico
El descubrimiento de la transcriptasa inversa
A través de una serie de experimentos realizados en los años 1940, 1950 y 1960, los principios por los cuales la información genética se transfiere en sistemas biológicos se demostraron. DNA sirve como el código, el cual fue luego transcrito dentro de un tipo de RNA (mRNA), que lleva el mensaje a ser traducido en proteínas.Estos experimentos formaron un paradigma tan firmemente creído, era conocido como el "dogma central". Sin embargo, en 1970, el trabajo sobre Virus tumorales de RNA mostró que tal vez el dogma central no explicó el cuadro completo.

Antecedentes
En 1961, Howard Temin comenzó a reunir pruebas de que fueron incompatibles con el dogma central. Temin, que dedicó su vida al estudio de los virus tumoralesde RNA (ahora conocidos como retrovirus), enfocó sus primeros trabajos sobre el sarcoma de Rous virus (RSV). Este virus de RNA es capaz de transformar las células normales en células cancerosas. Temin sintió la mejor explicación para el comportamiento del virus que fue un modelo mediante el cual el virus permanece en un estado latente, o proviral, estando en la célula. Sin embargo, ya que el RNAes notoriamente inestable, Temin propuso que el genoma de RNA de RSV se convierte en un Provirus de DNA. Con este modelo en mente, él propuso probar su hipótesis. Él acumuló datos que demuestran que el RSV es sensible a los inhibidores de la síntesis de DNA y sugiere que el DNA, complementario a la RSV RNA genómico, se presenta en las células transformadas. Otros investigadores, sin embargo noquedaron convencidos. Un experimento definitivo sería necesario para finalmente probar su modelo. Mientras tanto, otro virólogo, David Baltimore, estuvo estudiado la replicación de virus. Él tomó un enfoque bioquímico, mirando directamente para la síntesis de RNA y DNA en los propios viriones. Anteriormente había aislado la actividad de un RNA dependiente de la actividad de RNA polimerasa en virionesdel virus de la estomatitis vesicular, un virus de RNA sin genes de tumor. Su atención se volvió hacia el RNA de virus tumorales, estableciéndose finalmente en el virus de la leucemia murina de Rauscher (R-MLV). Con este organismo, él podría independientemente probar el modelo de Temin.

El experimento
Extraordinariamente, estos dos científicos viajaron por vías separadas al mismo conjuntocrítico de los experimentos. Ambos comenzaron con cepas de virus puras, los cuales luego interrumpieron parcialmente el uso de detergentes no iónicos. Con una cepa de virus alterados en mano, ellos podrían hacer la pregunta crucial: ¿Puede un retrovirus realizar la síntesis de DNA? Para responder a esta pregunta, cada grupo añadió deoxitimidina trifosfato radiomarcado (dTTP), junto con los otros tresdesoxinucleótidos trifosfato (dATP, dCTP, dGTP) a las preparaciones de viriones, y buscaron para la incorporación de dTTP radiactivo en el DNA. En efecto, en cada experimento dTTP marcado radiactivamente se incorporó en ácido nucleico. Cuando Baltimore añadió un ribonucleótido radiomarcado trifosfato (rNTP) y los otros tres ribonucleótidos trifosfatos a los virus alterados, él pudo detectar que nohabía síntesis de DNA. Para demostrar que el producto se había formado en DNA hecho. Ellos lo trataron con enzimas que específicamente degradan ya sea RNA (ribonucleasa, o RNasa) o DNA (desoxirribonucleasa, o DNasa). Ellos encontraron el producto para ser sensible solo a la DNasa. Los resultados de estos simples experimentos, que se resumen en la tabla anterior, mostraron que una enzima en laspartículas podría sintetizar DNA. Sin embargo, la pregunta sigue siendo. . . ¿Cuál era la plantilla?. Para mostrar una vez por todas que el DNA podría ser sintetizado a partir de una plantilla de RNA, tanto Baltimore como Temin preincubaron los viriones con RNasa, los cuales catalizan la degradación de RNA en ribonucleótidos monofosfatos (rNMPs). Si...