practica 10







UNIVERSIDAD ESTATAL DE SONORA
Unidad Académica Navojoa
Lic. Nutrición Humana.

MATERIA:
Microbiología en los Alimentos

FACILITADOR:
Lta. Ana Rosa Baca Ruiz

TÍTULO:
Practica No. 3 “Utilización de la tinción de GRAM”
INTEGRANTES:
Marleny Denisse Ybarra Jabalera
Rosa Amalia Cazares Bacasegua
Adriana Judith Félix González



Navojoa Sonora a 13 de Marzo del 2015.
Practica No.3
UTILIZACIÓN DELA TINCIÓN GRAM.

INTRODUCCIÓN.
La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio bacteriológico y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio de Microbiología las referencias a la morfología celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos,etc) se basan justamente en la tinción de GRAM 
Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram positivas y Gram negativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dosgrupos morfológicos distintos de bacterias). (MEM. Josefina Salomón Cruz)
OBJETIVO:
* Identificar la morfología y tipo de tinción (Gram positiva o Gram negativa) de las cepas proporcionadas.

FUNDAMENTO:
La tinción de Gram es una técnica diferencial comúnmente empleada en el diagnóstico microbiológico, fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. La mayor parte de las muestras sometidas aexamen cuando se sospecha infección bacteriana deben ser extendidas en frotis sobre laminillas de vidrio, teñidas y examinadas en el microscopio. Los reactivos empleados en la tinción de Gram son el cristal violeta (colorante básico), lugol (mordiente), alcohol cetona (decolorante) y safranina (colorante de contraste).
El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared celularbacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) que refuerza la unión del colorante. Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura y composición bioquímica de su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después del tratamiento con el decolorante conserva el colorante básico, por lo que se observan de color púrpura o violeta al microscopio. Las bacterias Gram negativas pierden elcolorante básico cuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular (lo que aumenta la permeabilidad celular), dando como resultado la pérdida del complejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razón por la cual estas bacterias se observan de color rojo al microscopio.


EQUIPO:microscopio óptico











MUESTRA: Proporcionada por la profesora.

MATERIALES:
Microscopio con objetivo de 100x
Portaobjetos
Cubreobjetos
Asa bacteriológica
Mechero de Bunsen
Aceite de inmersión.

REACTIVOS:
Cristal violeta
Lugol
Alcohol-cetona
Safranina
PROCEDIMIENTO:
1. Preparar el frotis bacteriano (puede ser exudado del interior de la boca).
2. Fijar la muestra: Se fijan lascélulas al calor sobre un portaobjeto
3. Teñir con cristal violeta 1min.
4. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
5. Cubrir con lugol 1 min.
6. Lavar con agua el exceso de lugol.
7. Decolorar con Alcohol-Acetona o con alcohol hasta que la preparación deje de perder color (30seg)
8. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
9. Teñir con safranina 1 min.
10. Lavar conagua para eliminar el colorante de contraste.
11. Secar la preparación al aire (o tallar)
12. Examinar al microscopio fijándose sobre todo en el color de cada preparación.
Las bacterias Gram(+) y Gram(-) se tiñen de una manera diferente, esto se debe a las estructuras de sus paredes.
Diferencias:
*Gram (+): Pared más gruesa, presenta varias capas de peptidoglucano, constituye el 80 o 90% de la...