Practica 4

“MICROBIOLOGÍA” Práctica 4. Elaboró: Dr. Jesús Hernández Romano.
TINCIONES.
PRELABORATORIO: 1. ¿Qué diferencia existe entre membrana bacteriana, pared bacteriana y cápsula bacteriana? 2. ¿Cuál es el componente de la pared bacteriana? 3. ¿Qué diferencia existe entre bacterias Gram positivas y bacterias Gram negativas en cuanto a su pared bacteriana? 4. ¿Qué es el lipopolisacárido (LPS)? 5.¿Qué es la lisozima?¿Donde se puede encontrar?¿Cuál es su mecanismo de acción? 6. ¿Cuál es el fundamento de la tinción de Gram? 7. ¿Cuál es la función del aceite de inmersión y con qué objetivo del microscopio se utiliza? 8. Explique como enfoca una muestra con el microscopio. 9. ¿Cómo se clasifican los microorganismos en base a su morfología microscópica?

INTRODUCCIÓN La tinción de Gramse descubrió en 1883 por Christian Gram, mientras intentaba teñir muestras de biopsias de manera que los microorganismos pudieran ser diferenciados del tejido circundante. La diferenciación por Gram se basa en las características de color que muestran la mayoría de las bacterias cuando se tratan con cristal violeta seguido de una solución de lugol. Ciertos microorganismos pierden el cristalvioleta rápidamente cuando se aplica alcohol etílico, mientras que otras lo pierden más lentamente. Después del paso de decoloración, se usa una contratinción con safranina. Las bacterias que resisten la decoloración retendrán el color azul o púrpura que confiere el cristal violeta, tales microorganismos se conocen como Gram positivos. Aquellos microorganismos incapaces de retener elcristal violeta, tomarán el color conferido por la safranina que es entre rosa y rojo, estos microorganismos reciben el nombre de Gram negativos. Es importante notar que la diferenciación se basa en la velocidad con que unos y otros microorganismos pierden el colorante, razón por la cual el procedimiento debe de realizarse con gran cuidado. Varios factores pueden afectar la tinción de Gram,incluyendo la edad del cultivo evaluado, la presencia de
autolisinas, y las condiciones de crecimiento. Conforme un cultivo envejece, las paredes bacterianas se hacen más permeables al complejo Iodo-cristal violeta, y por lo tanto, bacterias Gram positivas pueden dar un resultado similar a bacterias Gram negativas. La tinción con azul de metileno es una tinción simple que permite ver lamorfología de los microorganismos pero no permite distinguir diferencias en su respuesta al colorante, todos los microorganismos se tiñen de azul. También sirve para observar las estructuras fúngicas. OBJETIVO: Que el alumno sea capaz de realizar adecuadamente tinciones de Gram, de azul de metileno y de cápsula, conociendo el fundamento de las técnicas. MATERIAL REQUERIDO POR EQUIPO: 5 portaobjetos 1asa bacteriológica 1 mechero de Bunsen Papel seda para microscopio Aceite de inmersión Guantes Palillos bucales Muestras comerciales (yogurth, pulque, yakult, etc) Marcador indeleble Encendedor Papel toalla Diurex

REACTIVOS REQUERIDOS: Cristal violeta: Para tinción Gram y tinción simple. Cristal violeta (violeta de genciana)....................................................0.5 g Aguadestilada.................................................................................100 mL Lugol: Solución de yodo para tinción Gram. Yodo...................................................................................................1 g Yoduro potásico..................................................................................2 g Aguadestilada.................................................................................300 mL Safranina: Colorante de contraste para tinción Gram. Safranina.........................................................................................0.25 g Agua destilada..................................................................................100 mL Azul de metileno: Colorante de contraste para tinción de hongos. Azul de...