PRACTICA 9


CROMATOGRAFÍA
Definición:
La cromatografía es un método físico de separación en el que los componentes que se han de separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales está en reposo (fase estacionaria, F.E.) mientras que la otra (fase móvil, F.M.) se mueve en una dirección definida.
Es la técnica para separar componentes de una mezcla, y su posterior análisis, basada en que lasdistintas sustancias que forman los componentes de una mezcla se dejan arrastrar a diferentes velocidades sobre un soporte. El soporte puede ser papel, un gas, otro líquido, etc. Es un método físico de separación de componentes.
La cromatografía es una técnica que permite la separación de los componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos.
RETENCIÓN
Efecto producidosobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido.
La fase estacionaria es el medio en el que se realiza la cromatografía puede ser solido o liquido 
DESPLAZAMIENTO
Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.
La fase móvil es el eluyente es decir lamezcla de solutos empleados para separar la mezcla.
La característica que distingue a la cromatografía de la mayoría de los métodos físicos y químicos de separación, es que se ponen en contacto dos fases mutuamente inmiscibles. Una fase es estacionaria y la otra móvil.


Elución
El fenómeno de migración de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la fasemóvil, recibe el nombre de elución.




La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionaría, mientras que la móvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases.
Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyan de modo distinto entre la fasemóvil y la fase estacionaria.
Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase móvil; por el contrario los componentes que se unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez.

Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarsecualitativa y/o cuantitativamente.
Clasificación de las técnicas cromatográficas
De acuerdo con la forma del lecho cromatográfico:
Cromatografía plana
Se realiza sobre papel u otro material sólido. Suele llamarse “en capa fina” o “en capa delgada” porque la fase estacionaria recubre un soporte plano y rígido.

Cromatografía ascendente en capa fina







Cromatografía ascendente encapa fina: colocación de una muestra (con 3 componentes), desarrollo de la cromatografía y revelado del cromatograma.
Rf es el factor de retardo o retraso, que mide la movilidad relativa de cada componente con respecto al máximo posible, la distancia recorrida por el frente de fase móvil.
Componente 1: Rf = a / D
Componente 2: Rf = b / D 
Componente 3: Rf = c / D

Disposicionesexperimentales para realizar una cromatografía en papel descendente (izqda.) y ascendente (dcha.)

1: aplicación de la muestra 
2: se sumerge el extremo inferior en la fase móvil 
3 a 5: la fase móvil asciende por capilaridad y se va produciendo la separación de los componentes 
6: se marca el frente de avance del disolvente y se deja secar la placa
7: revelado de los componentes ya separados y medidade su avance
Cromatografía en columna
F.M. líquida, F.E. sólida: columnas de varios mm de diámetro y varios cm de longitud.
F.M. gas, F.E. sólida: columnas de unos 5 mm de diámetro y 1-20 m de longitud.
F.M. gas, F.E. líquida: columnas “capilares”, con menor diámetro y 30-100 m (incluso más) de longitud.

Funcionamiento de una columna, mostrando la carga de la muestra y diversos momentos a...