Practica bioquimica

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Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular I Segundo Laboratorio Agua, pH y Acción Amortiguadora de los Aminoácidos I. Introducción

Las biomoléculas polares orgánicas e inorgánicas de las células vivientes existen y reaccionan de manera primaria en un ambiente acuoso. El agua, una molécula notablemente escencial para la vida, solubiliza y modifica las características de biomoléculas comoácidos nucleicos, proteínas y carbohidratos al formar puentes de hidrógeno con sus grupos funcionales, interacciones que modifican las propiedades de dichas biomoléculas y sus conformaciones en una solución. La comprensión de los mecanismos homeostáticos utilizados por los organismos para conservar un entorno intracelular relativamente constante debe considerar el pH, el amortiguamiento del mismo anivel de los líquidos corporales y compartimientos subcelulares. Por otro lado tenemos que una de las múltiples funciones de los aminoácidos es que, tanto aminoácidos libres, así como, algunos que aún formando parte de las proteínas, pueden potencialmente funcionar como buffers. Esto se debe gracias a que los aminoácidos en un medio acuoso contienen un grupo carboxilo que funciona como ácidodébil, y un grupo amino que funciona como base débil. II. Objetivos

1. Definir el concepto de amortiguador (buffer) y estudiar sus funciones y modo de acción. 2. Conocer los componentes de un buffer. 3. Demostrar la acción de los amortiguadores en el pH. 4. Demostrar la acción amortiguadora de los aminoácidos. III. III a) Sustancia buffer 1. Se toman tres beakers de 25ml y se preparan de la siguientemanera: a) Beaker 1 (Problema 1): 10ml de agua destilada + 2 gotas de anaranjado de metilo. b) Beaker 2 (Problema 2): 8ml de agua destilada + 1ml de ácido acético + 1ml de acetato de sodio + 2 gotas de anaranjado de metilo. c) Beaker 3 (Control de color): 8ml de agua destilada + 1ml de ácido acético + 1ml de acetato de sodio + 2 gotas de anaranjado de metilo. Procedimiento

Se toman losbeakers 1 y 2 se procede a titular con gotas de ácido clorhídrico 0.1N hasta observar un cambio de color en comparación con el beaker 3. Cuente y anote las gotas utilizadas en cada caso. 2. Se toman tres beakers de 25ml y se preparan de la siguiente manera: a) Beaker 1 (Problema 1): 10ml de agua destilada + 2 gotas de fenolftaleína. b) Beaker 2 (Problema 2): 8ml de agua destilada + 1ml de ácido acético+ 1ml de acetato de sodio + 2 gotas de fenolftaleína. c) Beaker 3 (Control de color): 8ml de agua destilada + 1ml de ácido acético + 1ml de acetato de sodio + 2 gotas de fenolftaleína. Se toman los beakers 1 y 2 se procede a titular con gotas de hidróxido de sodio 0.1N hasta observar un cambio de color en comparación con el beaker 3. Cuente y anote las gotas utilizadas en cada caso. III b) Acciónbuffer de los amonoácidos 1. Se toman 2 beakers y se agrega 10ml de glicina 0.1N a cada uno y se procede a medir el pH de la misma (pH basal) 2. Se toma uno de los beakers y con el electrodo del pHmeter dentro de la solución, se procede a titular con HCl 0.1N de la siguiente manera: 5 veces 0.1ml (2 gotas) 5 veces 0.2ml (4 gotas) 14 veces 0.5ml (10 gotas) 5 veces 0.2ml (4 gotas) 5 veces 0.1ml (2gotas) En cada adición de HCl, esperar y anotar la medida de pH 3. Se toma el otro beaker con glicina y con el electrodo del pHmeter dentro de la solución, se procede a titular con NaOH 0.1N de la misma forma descrita en el paso anterior. LEER DE SU LIBRO DE TEXTO 1. AGUA, pH y BUFFER 2. GENERALIDADES, PROPIEDADES Y TITULACION DE LOS AMINOACIDOS

Acción Buffer de los Aminoácidos pH Basal deGlicina Volúmen HCl pH Volúmen NaOH pH

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