Practica de fotocolorimetria unmsm

PRÁCTICA N° 1 BIOQUIMICA



PRACTICA DE
FOTOCOLORIMETRÍA

* INTEGRANTES:
* CÁRDENAS GALLEGOS, JESÚS KEVIN
* FLORES PORTUGUEZ, FRANCESCO A.
* MALPARTIDA PORRAS, JOSÉ LUIS
* PARIONA CANCHIZ, ROBERTO PEDRO

GRUPO: “B” SALA: “B” MESA N°: 2

* PROFESOR RESPONSABLE:
LIC. T. M. MIGUEL SANDOVAL VEGAS

LIMA – PERÚ
2010

OBJETIVOS
* Realizar análisiscuantitativos utilizando la fotocolorimetría como método
* Entender la ley de Lambert-Beer como método para determinar la absorbancia en función a la longitud que atraviesa el haz de luz y la concentración de la solución coloreada
* Resaltar la importancia de esta técnica para calcular la concentración de ciertas muestras
* Destacar la importancia de los métodos de la curva de calibracióny el factor de calibración en la determinación de la concentración.
* Representar las concentraciones y absorbancias en un papel milimetrado y realizar la cuantificación de dos formas: la representación gráfica y la determinación frente a un blanco (estándar o patrón).

INTRODUCCIÓN

Las técnicas colorimétricas se basan en la medida de la absorción de radiación en la zona visible por sustanciascoloreadas. En algunas ocasiones, la muestra que deseamos determinar no posee color por sí misma; en tal caso, es preciso llevar a cabo un desarrollo de color empleando reactivos que den lugar a sustancias coloreadas con la muestra que interesa estudiar.
Utilizando términos quizás excesivamente simplistas puede definirse la espectrofotometría de absorción, como la medida de la atenuación que elmaterial a estudiar (muestra) efectúa sobre una radiación incidente sobre el mismo con un espectro definido. En general, las medidas se realizan dentro del espectro comprendido entre 220 y 800 nm, y este espectro, a su vez, puede dividirse en dos amplias zonas: la zona de la radiación visible, situada por encima de 380 nm, y la zona de la radiación ultravioleta situada por debajo de estos 380 nm.La región del infrarrojo se sitúa por encima de los 800 nm.

Ley de Lambert-Beer
La ley explica que hay una relación exponencial entre la transmisión de luz a través de una sustancia y la concentración de la sustancia, así como también entre la transmisión y la longitud del cuerpo que la luz atraviesa. Si conocemos l y α, la concentración de la sustancia puede ser deducida a partir de la cantidadde luz transmitida.
Las unidades de c y α dependen del modo en que se exprese la concentración de la sustancia absorbente. Si la sustancia es líquida, se suele expresar como una fracción molar. Las unidades de α son la inversa de la longitud (por ejemplo cm-1). En el caso de los gases, c puede ser expresada como densidad (la longitud al cubo, por ejemplo cm-3), en cuyo caso α es una secciónrepresentativa de la absorción y tiene las unidades en longitud al cuadrado (cm2, por ejemplo). Si la concentración de c está expresada en moles por volumen, α es la absorbencia molar normalmente dada en mol cm-2.
El valor del coeficiente de absorción α varía según los materiales absorbentes y con la longitud de onda para cada material en particular. Se suele determinar experimentalmente. La ley tiende ano ser válida para concentraciones muy elevadas, especialmente si el material dispersa mucho la luz. La relación de la ley entre concentración y absorción de luz está basada en el uso de espectroscopía para identificar sustancias.

Dónde:
* A es la absorbancia (o absorbencia)
* I0 es la intensidad de la luz incidente
* I1 es la intensidad de la luz una vez ha atravesado el medio
*l es la distancia que la luz atraviesa por el cuerpo
* c es la concentración de sustancia absorbente en el medio
* α es el coeficiente de absorción o la absorbancia molar de la sustancia
* λ es la longitud de onda del haz de luz
* k es el coeficiente de extinción
Curvas de calibración
Una curva de calibración relaciona las A ó %T con las concentraciones y su empleo es necesario...