Practica De Tecnicas De Laboratorio

UAEM
Escuela de Técnicos Laboratoristas
Técnicas de laboratorio 2
Alumno: Angel Barragán Medina
Profesora: Karina Flores
Practica: Tinción de Baar Ziehl Neelsen
Fecha de entrega: 17 de Mayo de 2012
Calificación: __________

Introducción: Tinción de Baar Ziehl Neelsen
Los primeros en realizar esta tinción fueron dos alemanes  Franz Ziehl, un bacteriólogo y Friedrich Neelsen, unpatólogo.
Esta tinción es del tipo diferencial, muy rápida y económica, esta tinción se basa, en los ácidos grasos (micólicos) de cadena larga de entre 50 y 90 carbonos, que contienen ciertas bacterias lo cual les da cierta resistencia a alcoholes-ácidos, por eso es que a esta tinción también se le conoce como tinción de bacilos ácido-alcohol resistentes o BAAR, esta tinción se realiza por lo general conla intención de identificar bacterias patógenas como lo pueden ser las bacterias causantes de la tuberculosis, las mico bacterias se tiñen de un color rojo debido a la acción del principal colorante utilizado en esta tinción que es la fucsina fenificada, mientras que aquellas que no contienen acido micólico se tiñen de un tono azul debido al azul de metileno.
Existen dos variantes de estatinción:
La primera variante es la de “en caliente” en la cual se fija el frotis de esputo con un mechero, después se le agrega la fucsina fenificada y se calienta durante 5 minutos esto ayudara a que el colorante penetre en la membrana celular y permita teñir con facilidad, después se lava con agua para retirar el exceso y en seguida se aplica el alcohol acido para decolorar las bacterias que nopresenten ácido-alcohol resistencia, después se enjuaga con agua una vez más para retirar el exceso, después se aplica un colorante de contraste que sería el azul de metileno durante un minuto y en seguida se lava con agua.
La segunda variante es la de Kinyoun o en frio en la cual no se fija la muestra con calor si no que en cuanto se prepara el frotis, se le aplica la fucsina fenificada y se dejareposar en vasos de Coplin durante 20 minutos, luego de eso se le aplica el decolorante de ácido-alcohol, se lava la muestra con agua y en seguida se le aplica el colorante de contraste (azul de metileno).
Los colorantes utilizados están compuestos por:
La fucsina fenificada está compuesta por una solución de fucsina básica, etanol, fenol (en forma de cristales) y agua destilada.
El azul demetileno usado para este tipo de tinción está compuesto por una solución de azul de metileno, etanol y solución acuosa de KOH.
Los resultados que podemos obtener con esta coloración son de diferentes tipos los cuales son:
Negativo (-): Si no encontramos BAAR en 100 campos observados o si encontramos menos de 3 bacilos en 300 campos.
Número exacto: De 1 a 9 BAAR en 100 campos observados.
Positivo(+): En promedio menos de 1 BAAR por campo en 100 campos observados.
Positivo (++): En promedio de 1 a 10 BAAR por campo en 50 campos observados.
Positivo (+++): En promedio más de 10 BAAR por campo, en 20 campos observados.

Material:
º Muestra de esputo º Pinzas de disección
º Colorante Fucsia fenificada º Alcohol ácido
º Colorante Azul de metileno º Agua
º Porta objetosº Mechero de Bunsen
º Microscopio º Aceite de inmersión

Metodología:
1.- Con las pinzas crear un frotis delgado sobre el porta objetos.
2.- Fijar con el mechero el frotis, pasándolo de dos a tres veces por la llama.
3.- Cubrir en su totalidad el frotis con fucsina fenificada durante 3 minutos y pasar por la llama 3 veces sin quemarla.
4.- Lavar lamuestra con el alcohol ácido a chorro continuo durante 5 minutos.
5.- Agregar azul de metileno durante 1 minuto.
6.- Lavar con agua y esperar que seque.
7.- Agregar el aceite de inmersión y observarlo con el lente de 100x.

Resultados:
MO | Forma | Agrupación | Gram+-/ácido resistencia | Esquema |
100x | Bacilo | Bacilo | Ácido Resistencia. | |
100x | Coco | Cocos | Gram + | |
100x |...