Practica: determinacion cualitativa de proteínas

Nombre de la práctica:Determinación cualitativa de algunas enzimas típicas | Práctica 5 | Paginas9 | Páginas de la1 – 9 |
Realizó: Brenda Carolina Gutiérrez ChávezCarmen Lucía Contreras IzquierdoFlor de Dalia Durán FloresNeftalí Castillo Ramos | Revisó:Aldo Amaro Reyes | Autorizó:Aldo Amaro Reyes |
Fecha: Jueves 19 de Agosto 2010 | Fecha: 19/08/2010 | Fecha:19/08/2010 |

Contenido |Página |
I. INTRODUCCIÓN | 2 |
II. OBJETIVO | 3 |
III. METODOLOGIA IV. 1. Material y equipo. IV. 2. Reactivos y soluciones. IV. 3. Requerimientos de seguridad IV.4. Disposición de residuos IV. 5. Procedimiento (diagrama). | 334445 |
IV. RESULTADOS. | 7 |
VI. DISCUSION. | 8 |
VII. CONCLUSIONES. | 9 |
VIII. BIBLIOGRAFIA | 9 |
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I.INTRODUCCION.

La electroforesis de proteínas en geles con una matriz de poliacrilamida, comúnmente denominada electroforesis en poliacrilamida (PAGE, 'polyacrilamide gel electrophoresis') es sin duda alguna una de las técnicas más ampliamente usada para caracterizar mezclas complejas de proteínas. La electroforesis en poliacrilamida es un método conveniente, rápido y económico a nivel de muestra puesse requieren sólo cantidades del orden de microgramos de proteína. (Biocel, 2010)
Se utiliza mayoritariamente para la separación de proteínas, aunque también puede ser útil para ácidos nucleícos. Los geles de poliacrilamida son soportes restrictivos del tipo II, por lo que, además de evitar la convección y minimizar la difusión, participan directamente en el proceso de separación.
Se preparan demodo que sus poros sean de un tamaño comparable al de las proteínas, de manera que produzcan un efecto de tamizado molecular; la separación electroforética depende entonces de la densidad de carga de las moléculas y de su tamaño, por lo que dos proteínas con idéntica densidad de carga, pero de tamaño diferente pueden ser separadas, ya que el soporte dificulta más el avance de la de mayor tamaño.Son químicamente inertes frente a las moléculas biológicas, transparentes y estables en un amplio intervalo de valores de pH, temperatura y fuerza iónica; son también resistentes a agentes desnaturalizantes (urea, detergentes), no presentan efecto EEO y son mecánicamente estables, por lo que pueden ser deshidratados y reducidos a una fina película, lo que facilita su almacenamiento.
Los soportesde elección para la electroforesis de proteínas son los geles de poliacrilamida (PAGE, polyacrilamide gel electrophoresis) debido a su buena resolución y gran versatilidad. Además, poseen una serie de ventajas tales como: ser químicamente inertes, estables en un amplio rango de pH, temperatura y fuerza iónica y fáciles de generar mediante la polimerizaciónde acrilamida. En la mayoría de los casos, el gel se dispone entre dos receptáculos independientes y separados que contienen tampón de electroforesis y los electrodos positivo y negativo, de forma que la conexión eléctrica entre ambos receptáculos sólo es posible a través del gel. Una vez que la electroforesis ha tenido lugar, el gel de poliacrilamidase puede teñir, documentar o incluso se puede purificar la molécula de interés cortando literalmente el fragmento del gel.
La polimerización de la acrilamida se obtiene por la adición de catalizadores de la polimerización que inician y aceleran el proceso de formación de un gel tridimensional. Normalmente, el proceso se inicia con la adición de persulfato amónico a una disolución acuosa(tampón) de ambos monómeros (acrilamida + bisacrilamida), seguido de la adición de TEMED (N,N,N’,N’-tetrametilendiamina) que actúa como propagador de la reacción de polimerización a pH básico (el pH ácido retarda la polimerización). Por lo tanto, ajustando las concentraciones de persulfato y TEMED puede controlarse la velocidad de polimerización. Siempre debe evitarse la presencia de oxígeno, pues...