Practica enzimas

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UNIDAD 3. ENZIMAS
FUNDAMENTO TEÓRICO.

Las enzimas son proteínas específicas con excepción de las ribozimas, que actúan como catalizadores de las reacciones bioquímicas en todos los seres vivos. La actividad de estas moléculas tan particulares puede comprobarse experimentalmente mediante la identificación y cuantificación de los productos formados en las reacciones que ellas regulan. Laacción de estas proteínas catalíticas se ve afectada por la variación de factores físicos y químicos tales como la temperatura, la concentración de la enzima y del sustrato, el pH, etc.

El peróxido de hidrógeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos pero debido a su toxicidad debe transformarse rápidamente en compuestos menos peligrosos. Para ello las células utilizan lacatalasa que descompone el H2O2 en agua y oxígeno.

2 H2O2 -------------------------> 2H2O + O2
Catalasa o peroxidasa

Esta reacción puede observarse por la formación de burbujas, las cuales se producen debido al desprendimiento de oxígeno. La cantidad de las mismas es directamente proporcional a la intensidad de la reacción y puede utilizarse como una medida de ella.

En estapráctica de laboratorio se diseñaron experimentos para verificar la actividad de la enzima y por último compararla con un catalizador inorgánico (MnO2).

ACTIVIDAD EXPERIMENTAL
1.1. FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS: CATALASA

1.1.1. Problema.
En esta actividad experimental se usará la catalasa presente en tejidos animales, vegetales y fúngicos como modelo para verificarla actividad catalítica las enzimas, en comparación a un catalizador inorgánico y evaluar ¿qué factores afectan la actividad enzimática?

1.1.2. Materiales y reactivos
Tabla 1. Materiales y reactivos por grupo
Materiales y equipos | Reactivos | Muestras |
Tubos de ensayo (20) | Peróxido de hidrógeno (5%) | | Champiñones | 100g |
Gradilla (2) | HCl (3M) | | Papa criolla | 100g |Pipeteador (1) | NaOH (3M) | | Hígado de res | 100g |
Baño maría a 37 y 80oC | Buffer de fosfatos (0.02M pH 7) | | Leche de cabra cruda | 100 ml |
Goteros( 2) | Agua destilada | | Espinaca | 100g |
Termómetro -10 a 50oC (1) | HgCl3 (2%) | | | |
Pinzas para tubos (1) | MnO2 | | | |
Pipetas de 5 ml (3) | | | | |
Cronómetro ( 1) | | | | |
Pipetas de 1 ml (2) | || | |
Probeta de 5 ml (1) | | | | |
Placa de calentamiento (1) | | | | |
Plancha de calentamiento | | | | |
Aro con nuez (1) | | | | |
Placa de calentamiento (1) | | | | |
Vasos de precipitados de 250 ml (4) | | | | |
Soporte universal (1) | | | | |
Vasos de precipitados de 100 ml (2) | | | | |

1.1.3. Procedimiento

A. Preparaciónde los homogenados

El procedimiento A lo realizarán previamente los monitores. Consiste en preparar homogenados, por separado, a partir de fragmentos de papa (50 g), hígado (50 g), champiñones (50 g) y espinaca (50 g) en una licuadora con 150 mL de agua destilada, hasta diluir parte de la muestra. (Recomendable hacer los cálculos para la preparación de la cantidad dependiendo del número degrupos de laboratorio).

Colocar cada homogenado en un vaso de precipitado previamente rotulado.

B. Verificación de la actividad de la catalasa

Tomar seis tubos de ensayo, en los cuatro primeros colocar 3mL de cada homogenado (agitarlos antes de su uso), en el quinto 3 mL de leche cruda de cabra y en el sexto agua destilada como blanco.

En cada tubo hacer una marca para indicarhasta donde llega el homogenado o la muestra. Adicionar 3mL de peróxido de hidrógeno a cada tubo. Observar y registrar el cambio en el nivel del líquido de cada tubo. Anotar en una tabla las observaciones y resultados correspondientes.

C. Reconocimiento del carácter exotérmico de la reacción catalizada por la catalasa.

Haga el montaje que se indica en la figura 1, procediendo de la...
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