Practica No.10 Ast Got
Determinación de AST/GOT
Fundamento:
AST
C4H6NO4NOH2O + 2-Oxo-glutaratoOxalacetato + L-Glutamato
MDH
Oxalacetato + NADH + H + L-Malato + NAD+ + H2O
Material y Reactivos:AST Buffer (R1). Composición:
L-Aspartato 240 mmol/L.
MDH (músculo de porcino) 600 U/L.
LDH (músculo de conejo) 600 U/L.
Tris Buffer, pH 7.5 80 mmol/L.
Enzima AST (R2). Composición:2-Oxoglutarato 12 mmol/L.
NADH (sal disódica) 0.18 mmol/L.
Espectrofotómetro capaz de realizar lecturas de absorbancia a 340 nm con 1 cm de paso de luz.
Baño de temperatura constante a 37ºC o portacubeta detemperatura controlada.
Pipetas serológicas o automáticas
Tubos de ensayo
Cronómetro.
Técnica:
* Prepare el reactivo de trabajo de AST de acuerdo a las instrucciones.
* Calibre a ceroel espectrofotómetro a 340 nm con agua destilada.
* Adicionar 200 mL (0.20 mL) de suero a cada tubo respectivamente y agitar levemente.
| Blanco (B) | Muestra(M) |
Agua destilada | 2.0mL | -|
Reactivo | - | 2.0mL |
Suero | - | 0.2mL |
0.2mL= 20µL
* Leer y anotar la absorbancia al minuto 1. Continúe incubando a 37°C y anotar el cambio de absorbancia a los 2 y 3 minutos. Elcambio debe ser constante.
* Determine el cambio de absorbancia por minuto (DA/min) y multiplicar por el factor 1746 para obtener los resultados en U/L.
Cálculos y Resultados:
Los valores sederivan en base al “coeficiente de extinción de absortividad micromolar” de NADH a 340 nm (0.0063). Una unidad por litro (U/L) de actividad de AST/GOT, es la cantidad de enzima que oxida un μmol/L deNADH por minuto.
Diferencia lectura 1 y 2
Diferencia lectura 2 y 3 = ΔA
2
UL= ΔAmin x 1746
Nombre: Castillo Pérez Mayari
Edad: 18 años
Sexo: Femenino
Min1: 1.800...
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