Practicas cromatograficas

Prácticas de Cromatografía

Indice

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL .................................................................................... 2 Cromatografía ascendente ............................................................................................. 2 Cromatografía descendente........................................................................................... 6Cromatografía bidimensional ..................................................................................... 11 EXPERIENCIAS DE CROMATOGRAFÍA EN PAPEL .......................................... 15 Cromatografía ascendente. Separación de pigmentos componentes de tintas comerciales. ................................................................................................................ 15Cromatografía ascendente. Separación de mezclas de indicadores de pH ................. 16 Cromatografía bidimensional ascendente. Separación de pigmentos de tinta ............ 17 CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA ......................................................................... 19 Experiencias de cromatografía en capa fina ................................................................... 29Cromatografía en capa fin. Separación de los pigmentos componentes de las tintas comerciales ................................................................................................................. 29 Cromatografía en capa fina, bidimensional. Separación de pigmentos de tintas ....... 30 Cromatografía en capa fina: Separación de aminoácidos ........................................... 31CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA .......................................................................... 36 CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA. SEPARACIÓN DE COLORANTES ......... 38 Determinaciones experimentales. ............................................................................... 41

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Prácticas de Cromatografía

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL

Cromatografía ascendente Mecánica En el fondo de la cubeta secoloca el disolvente, que alcanzará una altura de algunos milímetros. Las disoluciones test se manchan en puntos situados a lo largo de una línea que se habrá trazado, cerca de uno de los bordes, en una hoja cuadrada de papel de filtro. Estos son los llamados orígenes. A la hoja de papel se le da forma de cilindro y se coloca en la cubeta, introduciéndola en el disolvente, de modo que la línea delorigen quede un poco por encima del nivel del disolvente. Este último asciende en el papel por capilaridad, pasa sobre las manchas que constituyen el test y produce la separación cromatográfica de los componentes. Se seca el papel y las posiciones de las sustancias del test, si no aparecen evidentes por sí mismas, se revelan por reacción con un producto químico adecuado. Aparatos

Cubeta → PiezaA Tapa → Pieza B Papel de filtro, 25 25 cm→ Pieza F Clips de pinza (de plástico) → Pieza G Bandeja de inmersión → Pieza L Atomizador → Pieza Y Asa de siembra (microbiológica) → Pieza M
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Clips de acero inoxidable → Pieza N Papel. (Whatman, núm. 1) Se utiliza una hoja cuadrada de papel de 25 cm de lado. Se traza una línea de lápiz a través del papel a unos 2,5 cmde un borde. Comenzando a una distancia de unos 3 cm de un extremo, se marcan con lápiz puntos o cruces, a intervalos de 2 a 2,5 cm, a lo largo de la línea.
Aplicación de la muestra: se toma una gota de la solución con el asa de siembra y se deposita sobre el origen previamente marcado. La gota se extiende en el papel por la atracción capilar. El papel se coloca de forma que la línea del origenquede fuera del borde de la mesa o banco, con objeto de evitar que se manchen las hojas siguientes. Es una buena costumbre cubrir la zona de trabajo con una hoja de papel, grande y limpia, cuando se efectúa la aplicación de la muestra.

Cada uno de estos puntos servirá como origen para una solución de sustancias del test o para patrones de comparación. Debajo de cada origen se indica, también,...