Preparacion de medios de cultivos para bgnf

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOANÁLISIS
POSTGRADO EN MICROBIOLOGÍA, MENCIÓN CLÍNICA
CÁTEDRA DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA
MÉRIDA - VENEZUELA




Tutora: Prof. Tulia Díaz.

Abril, 2009





Autoras:Lcda. Carmen Sierra
Lcda. Eulimar Alfonzo
Lcda. Vanessa Rigo
Lcda. Sorelis Urdaneta
Lcda. Ysheth Millán
Lcda. Roselynn Moreno
Lcda. Mairena Sánchez
Lcda. Diana Pérez
INTRODUCCIÓN

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de losmicroorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología, por lo que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.

En los laboratorios de Microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida.Usualmente, para preparar un medio sólido se parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel. A estas preparaciones se le añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido usando Rojo Fenol, ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido, o inhibidores de crecimiento de ciertas bacterias medianteel uso, por ejemplo, de Violeta de Genciana, ya que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias Grampositivas (Prescott y col., 2003; Tortora y col., 2007).

Los medios de cultivos se pueden clasificar de acuerdo a su estado físico en medios líquidos, sólidos y semisólidos. De acuerdo a su composición, en medios sintéticos y complejos; y de acuerdo a su utilidad se dividen en medios detransporte, selectivos, diferenciales, enriquecidos, de enriquecimiento y de conservación (Forbes y col., 2004).

Para la elaboración de cada uno de estos medios de cultivo se puede partir de cada uno de sus constituyentes básicos o por simple rehidratación de productos asequibles comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivodeshidratados porque, además de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles. Es importante tomar ciertas consideraciones en el momento de su preparación para así obtener resultados confiables, por lo cual es necesario utilizar productos de calidad, agua destilada o desmineralizada con la propiedad microbiológica y fisicoquímica adecuada, material devidrio debidamente lavado y enjuagado con agua destilada o desmineralizada, llevar el control de tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización y nunca se deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante (Montiel y col., 2001).

DNAsa TEST AGAR
Es un medio diferencial

Fundamento:
Esta prueba se usa para determinar si un microorganismo es capaz de producir la enzimadesoxirribonucleasa (DNAsa), capaz de despolimerizar el DNA. Si el microorganismo en estudio sintetiza la enzima desoxirribonuclasa, va hacer capaz de hidrolizar el ADN presente en el medio y dicho proceso se evidenciará con la formación de un halo rosado alrededor de la colonia sobre un medio azul.

Composición del medio comercial:

Componentes
Gramos
Triptosa
20,0
Acido desoxirribonucleico2,0
Cloruro de Sodio
5,0
Agar
15,0

Preparación:

Componentes
Para 1000ml
Para 250ml
Agar DNasa
42,0g
10,5g
Agua Destilada
1000ml
250ml
Azul de Toluidina
0,1g
0,025g

Suspender en 250 ml de agua destilada la cantidad exacta del agar, mezclar y calentar hasta lograr su total disolución.
Esperar que el medio se encuentre a 50°C aproximadamente, agregar la cantidad exacta...