Preparaciones microscopicas

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LAS PREPARACIONES MICROSCOPICAS
Las preparaciones para observación en fresco se pueden obtener a partir de:
*Cultivos en medio liquido: cargar el asa bacteriológica con una gota de cultivo en medio líquido, depositarla en el portaobjeto y cubrir con cubreobjeto (procurando no dejar burbujas).
* Cultivos en medios sólidos: colocar una gota de agua sobre el portaobjeto. Cargar el asa (estéril)con una pequeña cantidad de bacterias de una colonia y resuspenderlas en la gota de agua. Colocar cubre y observar.
PREPARACIÓN DE EXTENSIONES DE CULTIVOS BACTERIANOS PARA TINCIONES
A partir de cultivos en medio líquido o bien en medio sólido, se procede como en el caso de la preparación en fresco:
- Extender la suspensión con el asa hasta conseguir una capa fina.
- Secarla preparación acercándola a la flama del mechero, evitando que se caliente demasiado, para no afectar la forma normal de los microorganismos.
- Una vez seca la preparación se procede a la fijación de la muestra, haciendo pasar la preparación de 3 a 4 veces por la llama del mechero (la llama debe tocar la parte inferior del portaobjetos).
- Una vez seca y fijada la preparación, se procede a sutinción y posterior observación.


MÉTODOS DE TINCIÓN Y LOS DISTINTOS TIPOS DE COLORANTES:
Son técnicas que permiten observar microorganismos en función de la capacidad de los mismos para retener (o no) determinadas sustancias colorantes, lo cual depende de las características de la célula y del colorante. Estos colorantes pueden ser de distintos tipos:
a.Catiónicos. Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el interior de las células y las tiñen. Ejemplos; azul de metileno, cristal violeta, safranina.
b. Aniónicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de modo que no tiñen a las células sino el entorno. En este caso se habla de tinción negativa. Ejemplos; eosina, nigrosina.
c. Liposolubles. Se mezclan con los lípidoscelulares y los tiñen. Ejemplo; Negro Sudán.
Por otro lado las tinciones pueden realizarse siguiendo distintos métodos:
TINCIONES SIMPLES. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen una composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de manera diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las células (Azul de metileno, safranina) o no(Nigrosina).
TINCIONES DIFERENCIALES. Se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distinta composición química, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción, lo que permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos, según su capacidad de tinción. En este apartado están dos tinciones de importancia taxonómica y médica: la tinción de Gram y la deácido alcohol resistencia (de Ziehl-Neelsen). Estas tinciones utilizan más de un colorante.
TINCIONES SELECTIVAS. Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta composición química. De modo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Ejemplo; Tinción de esporas, de flagelos, de paredes celulares, de corpúsculos metacromáticos. Pueden utilizarse uno o máscolorantes.


TINCIONES SIMPLES:
Azul de metileno (Tinción positiva). Permite teñir el interior celular. Tiñe microorganismos procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos solo se tiñen si están muertos. Algunas estructuras, como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más intensamente con este colorante que el resto de la célula.
Procedimiento
1. Extensión: poner unagota de agua en el portaobjetos y extender en ella la muestra (Escherichia y Bacillus) utilizando el asa de siembra.
2. Fijación: pasar el portaobjetos varias veces por encima de la llama del mechero de alcohol, sin permitir que llegue a hervir, hasta que se seque.
3. Añadir Azul de metileno y esperar 2'.
4. Lavar con agua
5. Secar.
6. Observar primero con el objetivo x40; luego se añade...
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