Proteinas

Solo disponible en BuenasTareas
  • Páginas : 6 (1452 palabras )
  • Descarga(s) : 0
  • Publicado : 7 de mayo de 2010
Leer documento completo
Vista previa del texto
AISLAMIENTO Y PURIFICACION DE PROTEINAS
Antes de iniciar el aislamiento o separación de proteínas de otras sustancias, se tiene que seleccionar la fuente de la proteína. Una fuente de proteína puede ser los tejidos de animales.*donde existe una mayor concentración de proteínas es en los microorganismos como las bacterias y la levadura. Las proteínas pueden separarse mediante diferentestécnicas dependiendo de sus características como son: el tamaño, solubilidad, polaridad, carga y selectividad.
Por Tamaño:
Dialisis-ultrafiltracion
Electroforesis en gel
Cromatografía de exclusión molecular
Ultracentrifugacion
Por Solubilidad:
Precipitación con sales (solución de NaCl)
Precipitación Solventes Orgánicos
Precipitación por PHPor Polaridad:
Cromatografía de adsorción
Cromatografía en papel
Cromatografía fase reversa
Cromatografía de interacción hidrofobica
Por carga:
Cromatografía de intercambio iónico
Electroforesis
Isoelectroenfoque
Por Selectividad:
Cromatografía de afinidad DIALISIS
En este tipo de separación se utiliza una membranasemipermeable que funciona como filtro, en la que las moléculas de agua y solutos pequeños la atraviesan mientras que las proteínas son retenidas (osmosis). Para explicar mejor el mecanismo de la diálisis esta el siguiente ejemplo: tenemos un recipiente con agua que tiene una baja concentración de sal, e introducimos una bolsa con una alta concentración de sal. Al estar estos dos en contacto, la bolsaempieza a liberar la sal para tratar de igualar las concentraciones de sal dentro y fuera de la bolsa.
ULTRAFILTRACION
Este tipo de filtración es muy similar a la diálisis con la diferencia que se utiliza una membrana mucho más fina, la cual separa las partículas de alto peso molecular de las de bajo peso molecular, reteniendo así las proteínas.
ULTRACENTRIFUGACION
En este tipo defiltración, se colocan las sustancias a separar en tubos de ensayo y posteriormente se introducen en la centrifuga y esta hace que se separen las moléculas de alta y baja densidad, sedimentándose o quedándose en la parte inferior del tubo de ensayo. Los componentes de la mezcla se separan por peso, tamaño, densidad y forma.
EXCLUSION MOLECULAR:
SEPARACION DE PROTEINAS USANDO GRADIENTE DE NaClEQUILIBRIO: Se bombea buffer a través de la columna hasta que el PH y la concentración de sal sea la correcta.
APLICACIÓN Y LAVADO DE LA MUESTRA:_ se agrega la muestra y es absorbida _
Se inicia el gradiente y los componentes absorbidos de la muestra son eluidos en orden de sus respectivas cargas netas.
Los componentes que aún quedan regenerándose son lavados.CROMATOGRAFIA HIDROFOBICA
En este método, la proteína se pega al soporte por los resto de aminoácidos apolares, cuanto más residuos de este tipo tenga en su superficie, más apolar será, más se retendrá en la columna y se eluirá más tarde. En este caso a elusión se realiza aumentando la apolaridad de fase móvil.
CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD
Este tipo de cromatografía se basa en laafinidad entre una proteína y un ligando unido a una matriz. El ligando puede ser específico: inhibidor, anticuerpo o un ácido nucleico, o inespecíficos: lectinas, colorantes o grupos hidrofóbicos. La columna de afinidad se prepara uniendo el ligando a la matriz sólida.
En este tipo de cromatografía la molécula que va a ser purificada es adsorbida específica y reversiblemente por un ligandoinmovilizado en un soporte insoluble (matriz). Se logra una purificación de varios miles de veces y un alto porcentaje de recuperación.
METODOS DE SOLUBILIZACION
Para poder purificar una proteína es que este en solución. Algunos factores que pueden alterar y/o dañar una proteína y modificar sus propiedades son la temperatura, el PH, adsorción y crecimiento de microorganismos.
Las proteínas...
tracking img