Protocolo Senescencia Bgal

Protocolo analisis de senescencia : Beta-galactosidasa asociada a senescencia

SOLUCIONES STOCK:
1. 40mM Acido cítrico/Fosfato Sodico (tampón fosfato) pH=6
0.1M Acido cítrico en 50ml H2O  1.05gen 50mL H2O
0.2M Fosfato Sodico Dibasico  1.4196g en 50mL H2O
(Mantenimiento a Tª ambiente y en oscuridad)

2. 1mg/ml de X-gal en dimethyformamide (DMF)
50µL de X-gal (20mg/ml) en 1mL de DMF.(Consevacion 4º en oscuridad).

3. 100mM Potassium Ferrocyanide (K4[Fe(CN)6*3 H2O]
0.4223g en 10mL H2O.
(Tª ambiente y oscuridad)

4. 100mM Potassium Ferricyanide (K3[Fe(CN)6]
0.329g en 10mlH2O.
(Tª ambiente y oscuridad)

5. 5M NaCl
2.9g en 10mL H2O

6. 1M MgCl2
0.9521g en 10mL.
SOLUCION TINCION:
1mL, de mg/ml de X-gal en dimethyformamide.
4mL, 40mM Acido cítrico/Fosfato Sodico(tampón fosfato) pH=6.
1mL, 100mM Potassium Ferrocyanide (K4[Fe(CN)6*3 H2O].
1mL, 100mM Potassium Ferricyanide (K3[Fe(CN)6].
0.6mL, 5M NaCl.
40µL, 1M MgCl2.
Llevar a 20mL H2O
INCUBACION: A 37ºcon agitación suave entre 2-16h. Importante que sea en un incubador si CO2. Ya que este podría provocar variaciones en el pH.

SOLUCIONES STOCK:
1. 40mM Acido cítrico/Fosfato Sodico (tampónfosfato) pH=6
0.1M Acido cítrico en 50ml H2O  1.05g en 50mL H2O
0.2M Fosfato Sodico Dibasico  1.4196g en 50mL H2O
(Mantenimiento a Tª ambiente y en oscuridad)

2. 1mg/ml de X-gal en dimethyformamide(DMF)
50µL de X-gal (20mg/ml) en 1mL de DMF.
(Consevacion 4º en oscuridad).

3. 100mM Potassium Ferrocyanide (K4[Fe(CN)6*3 H2O]
0.4223g en 10mL H2O.
(Tª ambiente y oscuridad)

4. 100mMPotassium Ferricyanide (K3[Fe(CN)6]
0.329g en 10ml H2O.
(Tª ambiente y oscuridad)

5. 5M NaCl
2.9g en 10mL H2O

6. 1M MgCl2
0.9521g en 10mL.
SOLUCION TINCION:
1mL, de mg/ml de X-gal endimethyformamide.
4mL, 40mM Acido cítrico/Fosfato Sodico (tampón fosfato) pH=6.
1mL, 100mM Potassium Ferrocyanide (K4[Fe(CN)6*3 H2O].
1mL, 100mM Potassium Ferricyanide (K3[Fe(CN)6].
0.6mL, 5M NaCl.
40µL,...