Proyecto Reactivos

APENDICE A

Preparación de Soluciones

Buffer 10 mM Tris/1.0 mM EDTA a pH = 8.0. Se pesaron 1.2114 g de Tris base y 0.2923
g de EDTA y se disolvieron en 900 ml de agua desionizada. Acontinuación se ajustó el pH
a 8 con unas gotas de HCl. Cuando la solución tuvo el pH indicado se aforó a un litro con
agua desionizada. Posteriormente se filtró a 0.45 μm y se desgasificó.
Buffer 10 mMTris/1.0 mM EDTA a pH = 8.0 + 2 M NaCl. Se pesaron 1.2114 g de Tris
base, 0.2923 g de EDTA y 116.88 g de NaCl y se disolvieron en 900 ml de agua
desionizada. A continuación se ajustó el pH a 8 con unasgotas de HCl. Cuando la solución
tuvo el pH indicado se aforó a un litro con agua desionizada. Posteriormente se filtró a 0.45
μm y se desgasificó.

Medios de cultivo. El medio de cultivoutilizado para crecer las células de E. Coli JM109
con el plásmido pRL-CMV fue el Luria-Bertani (LB). La composición por litro de medio
fue la siguiente: 10 g de peptona o triptona, 5 g de extracto delevadura y 10 g de cloruro de
sodio. Por otro lado, para crecer las celulas de E. coli. con el plasmido pVR1012-NH36 se
utilizó al medio 2TY. La composición por litro de medio fue la siguiente: 16 gde peptona o
triptona, 10 g de extracto de levadura y 5 g de cloruro de sodio. El procedimiento de
preparación de los medios de cultivo se llevo a cabo disolviendo la triptona, el extracto delevadura y el cloruro de sodio en 900 ml de agua desionizada. Seguidamente se ajustó el pH
en 7.5 y después se aforó a un 1 litro usando agua desionizada. Por último se esterilizó el
medio poniendo lasolución en la autoclave por 20 min a 15 psi (1.05 kg/cm2). Nota: Si se
pesa exacto no es necesario ajustar el pH del medio.
Preparación del inóculo. El procedimiento de preparación del inoculo serealizó
preparando 100 ml de medio de medio de cultivo en un matraz 500 ml. Seguidamente se
esterilizó el medio en la autoclave por 20 min a 15 psi. Después se agregó 0.1 ml de una
solución de...