Pruebas bioquimicas e. coli

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CARACTERIZACION BIOQUIMICA DE ENTEROBACTERIAS Y BACILOS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA
FACULTAD DE CIENCIAS
UNIVERSIDAD DEL VALLE
OCTUBRE DE 2010

* Introducción

Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.

Susistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no; para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.
Las pruebas o ensayos bioquímicos, sonpruebas simples que se han desarrollado para demostrar en forma clara una determinada característica bioquímica como presencia o ausencia de una determinada actividad enzimática, grupo de enzimas o determinada vía metabólica, crecimiento a una determinada temperatura, crecimiento en presencia de inhibidores, etc.
Para el caso de la práctica de laboratorio realizada, se empleo Escherichia coli,microorganismo de la familia Enterobacteriaceae, la cual está formada por bacilos gramnegativos aerobios, anaerobios facultativos, no esporulados. Todas las especies son oxidasa negativos, reducen nitratos a nitritos y fermentan glucosa. Pueden ser móviles o inmóviles. Se encuentran en la flora normal del tracto digestivo del hombre y animales.

Son bacterias poco exigentes, sobreviven en elambiente, contaminan agua y alimentos y crecen en medios de cultivo comunes.

* Objetivo general
Aplicar e interpretar las diferentes pruebas bioquímicas a Enterobacterias y Bacilos.

* Objetivo especifico
Aplicar e interpretar las pruebas bioquímicas aplicadas a una cepa de Escherichia coli.

* Escherichia coli en Agar Mc Conkey
El agar Mc Conkey es un medio sólido, diferencial yselectivo. Se usa para la discriminación de bacterias con capacidad de fermentar la lactosa (Lac + y -). Composición g/l:
- Peptona 20.0: fuente de nitrógeno y carbono para las Lac -.
- Lactosa 10.0: fuente de carbono para las Lac +.
- Sales biliares 2.5: le confiere carácter selectivo, inhibiendo el crecimiento de Gram +.
- Cloruro sódico 5.0: para mantener la tonicidad del medio (evitarosmosis).
- Rojo neutro 0.05: indicador que va hacer que el medio vire de coloración. Si las bacterias son Lac +, producirán ácidos derivados de la fermentación que darán al medio un aspecto rosáceo; si por el contrario son Lac -, el medio se gasificará por el uso de la peptona y se tornará amarillo.
- Cristal violeta 0.001: interfiere junto con las sales biliares en la selectividad del medio.
-Agar-agar 15.0: da consistencia al medio.


Imagen 1. Lac + Imagen 2. Lac –

Dado que E. coli es una bacteria lac +, el agar Mc Conkey se torna de color rosado como resultado de los ácidos derivados de la fermentación de la lactosa (imagen 1).

Microorganismo | Familia | Tinción | Forma | Movilidad |
Escherichia coli |Enterobacter | Gram − | Baciloscortos noesporulados | Flagelos perítricos |

* Prueba TSI (Triple Sugar Iron ó Triple Azúcar Hierro)
Es un medio para la diferenciación de Enterobacteriaceae basado en la producción de sulfuro de hidrogeno fermentación de lactosa, sacarosa y glucosa.

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para eldesarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio...
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