Pruebas bioquimicas

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PRACTICA N° X:
“PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA IDENTIFICAR BACTERIAS”
OBJETIVOS.
* Identificar bacterias de interés farmacéutico, a través de su metabolismo microbiano.
* Realizar pruebas para determinar la actividad enzimática sobre los carbohidratos y sales orgánicas como principales fuentes de carbono.
* Realizar pruebas de hidrólisis para aminoácidos y proteínas para demostrar suactividad enzimática.
* Realizar pruebas para demostrar la actividad enzimática en los procesos de óxido-reducción.

INTRODUCCIÓN.
Una identificación bacteriana se puede realizar tras el estudio de las características morfológicas y bioquímicas de los microorganismos. Las actividades enzimáticas son ampliamente utilizadas para diferenciar bacterias. Incluso las bacterias estrechamenterelacionadas pueden ser separadas en especies diferentes mediante el empleo de pruebas bioquímicas. Además, las pruebas bioquímicas pueden proporcionar datos acerca del nicho de la especie en el ecosistema.
Al igual que la mayor parte de los seres vivos, las bacterias son capaces de modificar el ambiente que las rodea, captando sustancias necesarias para su multiplicación y liberando al medio productos dedesecho, enzimas, exotoxinas, etc. Las interacciones que cada tipo bacteriano establece con el entorno son propias y características. Por ello la caracterización de las enzimas es una importante herramienta útil para la identificación y clasificación de bacterias. [1, 2]
Con este fin, existen en el mercado una gran variedad de medios de cultivo diseñados no solo para permitir el crecimiento yla multiplicación de los microorganismos, sino también para inhibirlos (medios selectivos) o resaltar determinadas características metabólicas (medios diferenciales). El tiempo necesario para la identificación puede reducirse si se emplean medios de cultivo selectivos y diferenciales o métodos de identificación rápida. [3]

RESULTADOS.
La siguiente tabla muestra los resultados obtenidos encuanto al cambio de color en los medios de cultivo tanto para los controles positivos como para los controles negativos:

Tipo de Prueba | Testigo | Control (+) | Control (-) |
Caldo Rojo Fenol | Naranja pálido | E. coliAmarillo | SeudomonaAmarillo pálido |
TSI | Rojo | EnterobacteriaAmarillo | SeudomonaAmarillo en la parte superiorRojo en la parte inferior |
LIA | Morado |EnterobacteriaMorado | E. coliMorado |
Almidón | Incoloro | B. subtillis.Ligera turbidez | SeudomonaLigera turbidez |
Gelatina | Incoloro | S. aureusIncoloro | E. coliIncoloro |

Prueba con H2O2 (catalasa)
B. subtillis: No hubo ningún tipo de reacción, por lo tanto la prueba fue negativa.
S. aureus: Desprendimiento de oxigeno en forma de burbujas, lo cual revela la presencia de la enzima catalasa, y por lotanto la prueba fue positiva.

Resultados de los controles (+) al incubar por 24 horas después de la inoculación.

Caldo rojo de fenol
Presentó turbidez, en el cual se aprecia un cúmulo blanco en el fondo del tubo; cambió de una coloración naranja a amarillo, lo cual indica un cambio de pH básico a pH ácido, esto fue provocado por la fermentación de la sacarosa.

LIA
Elmedio presenta crecimiento bacteriano (Enterobacterias), las colonias son de color blanco, de un aspecto húmedo. Esta prueba fue positiva, porque en el fondo del tubo sobresalía un color morado intenso, lo cual nos releva que se realizó la descarboxilación de aminoácidos.

TSI
Se inoculó con Enterobacterias, este medio de cultivo cambió de color rojo a un color amarillo, debido al cambio delpH; se observó que dicho microorganismo pudo fermentar la glucosa, sacarosa y lactosa, además de que produjo gases debido a que el medio fue desplazado.

Almidón
La prueba fue positiva: el medio de cultivo con yodo muestra algunas zonas incoloras, lo cual indica que la bacteria produce amilasas para metabolizar dicho polisacárido.

Gelatina
Se inoculó con S. aureus, se determina...
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