Pruebas bioquimicas

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MEDIOS DE AISLAMIENTO Y Enriquecimiento

Si se desea recuperar determinados m.o. de sus ecosistemas naturales (agua, tierra, alimentos, etc.) puede recrearse en el laboratorio un medio ambiente artificial que favorezca el crecimiento de ellos frente a otros m.o. que los acompañen en ese ecosistema. Se puede emplear un medio de cultivo y condiciones de incubación (atmósfera, temperatura, pH)considerando las características fisiológicas del m.o. buscado, para otorgarle ventajas frente al resto de m.o. de ese ecosistema. Pretendemos inhibir la mayor cantidad posible de m.o. no deseados, de manera que estos no interfieran durante el aislamiento de los que sí interesan.

Un esquema general para el enriquecimiento, aislamiento e identificación de m.o. es el siguiente:

Debemos realizarlas siguientes consideraciones si deseamos detectar y aislar un determinado tipo de m.o. y simultáneamente minimizar la interferencia de otros:

Muestra
Elegir la muestra adecuadamente. El m.o. que se está buscando debe ser factible de estar presente, ya sea si lo estamos buscando per se, o como contaminante.
Debemos considerar si es útil someter la muestra a un tratamiento previo. Cuanto mayorselección se realice en este paso inicial, menos selectivos deberán ser los medios de cultivo a utilizar. ¿Debemos comenzar con un enriquecimiento o aislar la muestra directamente? Si el m.o. que deseamos aislar está en un bajo número, se siembra la muestra en un caldo de cultivo que favorezca su multiplicación (enriquecimiento). Cuando un enriquecimiento se realiza en un medio formulado parafrenar el desarrollo de m.o. acompañantes no deseados, se denomina enriquecimiento selectivo. Cuando el m.o. deseado está en alto número, no se necesita realizar un enriquecimiento, y se puede sembrar la muestra en un medio sólido adecuado directamente.

Medio de cultivo

Debemos realizar una formulación adecuada de los medios de cultivo empleados. En general en las primeras etapas se utilizanmedios de cultivo selectivos. Dicha selectividad se puede determinar ya sea, a) agregando un inhibidor de la flora acompañante, o b) haciendo el medio restrictivo al incluir un nutriente que sólo el m.o. deseado sea capaz de utilizar.
Debemos utilizar las condiciones de incubación adecuadas: temperatura, luz, atmósfera (aerobia o anaerobia, atmósfera con concentración de CO2, etc.).
Loscomponentes del medio de cultivo que se pueden manejar son:
• Fuente de carbono. A modo de ejemplo, se podrían quitar todos los compuestos orgánicos para permitir el crecimiento de m.o. autótrofos que son capaces de obtener su fuente de carbono del CO2 (que difunde de la atmósfera al medio o por agregado de bicarbonato). O incluir exclusivamente una fuente de carbono particular, por ej, fenol siqueremos aislar degradadores de ese compuesto.
• Fuente de nitrógeno. Se puede omitir el agregado de fuente nitrogenada (orgánica u inorgánica) para permitir el crecimiento de fijadores libres de nitrógeno, que son capaces de obtener su fuente de nitrógeno del N2 atmosférico.
• Fuente de energía. Si no se agrega ningún compuesto capaz de ser utilizado como fuente de energía y se incuba a laluz, sólo crecerán los m.o. fotosintéticos que usan la luz como fuente de energía.
• Se pueden agregar o no compuestos que sean utilizados como factores de crecimiento (vitaminas, aminoácidos, ácidos nucleicos, ácidos grasos, etc.) según se necesiten o no.

Pruebas bioquímicas
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Indol

Introducción

El indol es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácidotriptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con producción de indol, ácido pirúvico y amoníaco. La producción de indol es una característica importante para la identificación de muchas especies de m.o.

Principio

La prueba de indol está basada en la formación de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del...
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