Pruebas Febriles


ANTÍGENOS FEBRILES

AGENTE DE DIAGNÓSTICO

SIGNIFICADO CLÍNICO
La infección causada por microrganismos de diversas es-pecies produce entre otros síntomas una marcada elevación de la temperatura, tal es el caso de la fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi, S. enteritis, así como las paratifoideas causadas Por S. paratyphi A y B, y el tifo causado por el genero Rickettsias. Lainfección por estos microorganismos induce a una respuesta inmune de tipo humoral con la producción de anticuerpos que pueden ser detectados con el antígeno específico. Debido a la dificultad existente para el aislamiento de las Rickettsia sp, el antígeno empleado para la determinación de anticuerpos es el de Proteus OX-19, el cual presenta una reacción cruzada con bacterias del genero Rickettsia. Lareacción de Huddleson es un método serológico que detecta anticuerpos contra B. abortus, B. melitensis y B. Suis , agentes causales de la brucelosis; también conocida como fiebre de malta o fiebre ondulante por el cuadro febril característico que se presenta.

FUNDAMENTO
La prueba se basa en una reacción inmunológica entre los anticuerpos séricos y el antígeno correspondiente produciendo unareacción de aglutinación macroscópica.

CONTENIDO
Tífico “O” - Salmonella typhi; Antígeno somático, pH: 6.5 ±1.0
Tífico “H” -Salmonella typhi; Antígeno flagelar, pH:6.5 ±1.0
Paratífico “A” - pH: 6.5 ±1.0
Paratífico “B” - pH: 6.5 ±1.0
Proteus OX-19 - pH: 6.5 ±1.0
Brucella abortus - pH: 6.5 ± 1.0

Suero control negativo: Suero de conejo el cual no ha sido inmunizado contra ningúnantígeno, por lo que no muestra ninguna aglutinación con los antígenos en suspensión.
Suero Control Positivo: Suero de conejo el cual ha sido inmunizado contra todos los antígenos febriles en una suspensión.

MATERIALES REQUERIDOS, NO INCLUIDOS
Pipetas serológicas
Placa de Reacción
Agitador

RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Obtenga sangre venosa y separe el suero evitando lahemólisis.

MÉTODO DE PRUEBA RÁPIDA EN PLACA
Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que se esté usando.
NOTA:
El reactivo así como los sueros, deben alcanzar la temperatura ambiente para comenzar la prueba.
1. Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades del suero a analizar: 0.08 mL, 0.04 mL, 0.02mL, 0.01 mL y 0.005 mL (EL SUERO DEBEESTARTOTALMENTE CLARO).
2. Agitar el antígeno a utilizar para tener una suspensión uniforme.
3. Añadir 30µL de la suspensión de antígeno a cada una de las diferentes cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automáticas (el gotero incluido proporciona una gota de 30-40µL).
4. Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero.
5. Girar laplaca manualmente o utilizando un agitador mecánico (120 rpm) durante 2 minutos.
6. Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinación macroscópica.
7. Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
El grado de aglutinación se registra como sigue: 4+ Aglutinación del 100% de los organismos 3+ Aglutinación del 75% de losorganismos 2+ Aglutinación del 50% de los organismos 1+ Aglutinación del 25% de los organismos (- ) Aglutinación del 0% de los organismos. El título del suero será la inversa de la dilución más alta en donde se observa una aglutinación del 50% de microorganismos (2+). Las diluciones del suero en la prueba en placa son aproximadamente equivalentes a las diluciones para prueba en tubo como se muestraa continuación.

VOLUMEN DEL SUEROTITULO

0.08 mL1: 200.04 mL1: 400.02 mL1: 800.01 mL1: 1600.005 mL1: 320

MÉTODO DE TITULACIÓN EN TUBO:
Mezcle bien la suspensión de antígeno mediante agitación suave; prepare una dilución 1:20 del antígeno a utilizar en solución salina.
1. Colocar 7 tubos de 13 x 100 mm en una gradilla para cada antígeno a probar, marcándolos del 1 al 6 y el...