Purificacion de adn

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Protocolo QIAGEN
1. Pesar 100 mg de la muestra. 2. Añadirle 400 µl del tampón AP1, 4 µl de RNasa A (100 mg/ml) y 20 µl de proteinasa K. Mezclar vigorosamente. 3.Incubar la mezcla a 65ºC durante 2 horas. 4. Añadir 130µl del tamón AP2, mezclar bien e incubar 5 minutos en hielo. 5. Centrifugar durante 5 minutos a 13000 rpm. 6.Recoger el sobrenadante y pasarlo a un tubo-columna QIAshredder y centrifugar durante 2 minutos a velocidad máxima. 7. Transferir el líquido que se ha filtrado altubo de abajo a un tubo eppendorf nuevo, sin arrastrar ningún resto de precipitado (si lo hay). 8. Añadir 1,5 volúmenes de tampón AP3/E y mezclar inmediatamentemediante pipeteo. 9. Recoger 650 µl de esa mezcla, incluyendo cualquier precipitado que pueda haberse formado, a la columna DNeasy mini spin. Centrifugar durante 1minuto a velocidad mayor a 8000 rpm (10000 rpm) y desechar el líquido filtrado. 10. Repetir el paso anterior con la muestra restante. Desechar el filtrado y el tubocolector. 11. Colocar la columna DNeasy en un tubo nuevo de recogida, añadir 500 µl de tampón AW y centrifugar durante 1 minuto a 10000 rpm. Desechar el filtrado yreutilizar el tubo para el siguiente paso. 12. Añadir 500 µl de tampón AW a la columna DNeasy y centrifugar durante 2 minutos a 13000 rpm para secar bien la membrana.13. Transferir la columna DNeasy a un microtubo de 1,5 o de 2 ml y añadirle 100 µl de tampón AE precalentado a 65 ºC directamente en la membrana DNeasy. Incubar 5minutos a temperatura ambiente y centrifugar durante 1 minuto a 10000 rpm. 14. Repetir el paso anterior. 15. Guardar la muestra obtenida en congelación.

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