Quimica

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Historia.-

1959 Yalowy Berson, precursos de los ensayos inmunoenzimaticos que fueron descritos originalmente en 1971 por Engvall y perlmann. Y Van Wemeny Y Schuurs.
El uso de material radiactivo ha limitado el uso del radioinmunoensayo y a la vez a popularizado el empleo del imunoensayo enzimatico (EIA del que hay 2 tecniocas principales :
• El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas
• Elensayo inmunologico multiplicado por enzimas

Elisa

La prueba de ELISA se basa en la relacion antigeno-anticuerpos, uno de los cuales debe ser de reactividad conocida.
El color se genera por la interaccion de un sustrato cromogenico y una enzimaque ha sido acoplada al anticuerpo detector.
Si debe medirse el anticuerpo, se coloca el antigeno en la fase solida, como una capa de captura.Después de la relacion del antigeno con el suero del paciente, la capa deteccion puede ser un reactivo antiinmunoglobulina clase especifica (IgM o IgG) para detectar respuesta de anticuerpos clase especificos.

Los metodos de ELISA dependiendo de la actividad enzimatica se dividen en dos tipos:

• Competitivos

• No competitivos

Elisa competitivo
Un tercer uso de ELISA está a través delatascamiento competitivo. Los pasos para este ELISA son algo diferentes que los primeros dos ejemplos:
1. El anticuerpo sin etiqueta se incuba en presencia de su antígeno.
2. Éstos limitan complejos del anticuerpo/del antígeno entonces se agregan a un antígeno cubierto bien.
3. Se lava la placa, para quitar el anticuerpo desatado. (Más el antígeno en la muestra, cuanto menos el anticuerpo es capazde atar al antígeno en bien, por lo tanto “competición. ”)
4. anticuerpo secundario, específico al anticuerpo primario se agrega. Este segund anticuerpo se junta a la enzima.
5. Se agrega un substrato, y las enzimas restantes sacan una señal fluorescente.
Para ELISA competitivo, cuanto más alta es la concentración original del antígeno, más débil es la señal eventual.
(La nota que algunos kitscompetitivos de ELISA incluyen enzima-ligó el antígeno más bien que enzima-ligó el anticuerpo. El antígeno etiquetado compite para los sitios obligatorios del anticuerpo primario con su antígeno de la muestra (sin etiqueta). Más el antígeno en la muestra, el antígeno menos etiquetado se conserva en el pozo y más débil es la señal.)

En este método, el anticuerpo de la muestra va competir con elconjugado por un numero limitado de sitios de unión del anfígeno. Habra ausencia de color en una muestra positiva debido a que el sustrato no encontrara a la enzima porque el conjugado ha sido desplazado por el anticuerpo presente en la muestra.
La prueba Elisa de tipo competitivo difiere en que el anticuerpo antivih de la muestra compite con el conjugado (que es un anticuerpo también dirigidocontra el antígeno del VIH) para ocupar sitios reactivos en el antígeno fijado. Así, en este tipo de prueba, tanto la muestra que contiene el anticuerpo antivih, como el conjugado se agregan a la fase sólida (conteniendo el antígeno del VIH) al mismo tiempo. Si la concentración de anticuerpos en la muestra es alta, muy poco del conjugado puede fijarse a los antígenos inmovilizados, ya que muestra yconjugado compiten por los mismos lugares del antígeno. Habrá ausencia de coloración dado que no habrá fijación de la enzima como para unirse al sustrato.


Inversamente, con muestras que contienen poco o ningún anticuerpo antivih, se fijará más conjugado al antígeno en la fase sólida y la consiguiente adición de sustrato provocará la presencia de color. Por estó, la cantidad de anticuerposdesconocidos en la muestra analizada es inversamente proporcional a la cantidad de coloración que aparezca.
Consta de las siguientes etapas:
• Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente patógeno a detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no fijados.
• Adición en concentración conocida de una mezcla de antígenos del anticuerpo utilizado...
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