Quimica

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  • Publicado : 1 de febrero de 2012
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Se preparó 300ml de bufer TAE 1X poniéndolo en una probeta 6ml de buffer TAE 50X y completándolo con agua destilada hasta llegar a los 300ml. Luego se pesó y transfirió a un frasco de125ml con tapa de rosca 0.75 de agarosa. Se le añadió a este frasco 1.5ml de TAE buffer 50X y agua destilada hasta llegar a 75.0 ml. Luego se calentó la agarosa hasta que hirvió y esta sedisolvió. Se dejó enfriar hasta que llego a una temperatura de 50 grados Celsius y se le añadió 2uL de ethidium bromide a la preparación. Se utilizó una bandeja casting tray y se lecoloco un peine, como precaución para que no hubiese perforaciones y se escapar el DNA. Se vertió la agarosa en la bandeja dejándola enfriar hasta que se solidifico y torno grisácea. Secalculó la concentración del DNA en las muestras fue transferido a un micro tubo, se le añadió por consiguiente 1uL del gel loading dye y se completó con agua pura hasta que llego a 12uL. Parapreparar la corrida de electroforesis se llenó la cámara con 300ml de TAE buffer (1X) y se removió el peine del casting tray que sirvió como pozos para colocar las muestras del ADN. Seorientó la bandeja de manera que los pozos donde se colocaron las muestras quedaron hacia el lado del electrodo negativo. En el primero pozo a la izquierda se colocó 10 uL de la solución yapreparada: DNA ladder. En el siguiente pozo se colocó 12 uL de las muestras. Se tomó en cuenta que el runnig buffer estuviera sobre el nivel de la agarosa. Se colocó el electrodo positivoy el negativo en el power supply . Se tapó la cámara de electroforesis, se encendió el power supply y se aumentó el voltaje a 5 – 7 voltios/cm. Se dejó correr el DNA hasta que el gelloading dye migro aproximadamente 75% de la distancia del gel. Se insertó la punta de una botella tipo squeeze y se le añadió un poco de agua por debajo del gel para poder sacar el casting tray.
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