RADIO INMUNO ANALISIS

Imagen para el Diagnóstico: Medicina Nuclear

UNIDAD
UNIDAD 20. RADIOINMUNOANÁLISIS: RIA
1. Desarrollo de las pruebas de RIA
2. Elementos del RIA
3. Métodos de separación
4. Contaje de la actividad de las muestras
5. Representación de los datos y cuantificación
El RIA es una técnica in vitro de laboratorio de análisis que utiliza isótopos
radioactivos para cuantificar sustancias enlíquidos orgánicos, generalmente sangre
venosa.
Los procedimientos de Radioinmunoanálisis (RIA), se fundamentan en las
observaciones realizadas en 1956 por Yalow y Berson, y Ekins (1960) a partir de estudios
de cuantificación de insulina mediante unión competitiva. A lo largo de estos años, las
técnicas de RIA han contribuido de manera importante al avance de muchas
especialidades médicas, comoes el caso de la Endocrinología, permitiendo la
determinación de gran cantidad de sustancias tales como hormonas, fármacos y sus
metabolitos.
La principal ventaja que ofrecen estas técnicas frente a métodos de cuantificación
anteriores es su sensibilidad, es decir su capacidad para medir cantidades muy
pequeñas de la sustancia a estudio, derivada de la posibilidad de cuantificar un trazadorradiactivo. Además, aporta una elevada especificidad, determinando sólo la sustancia
que queremos estudiar, gran exactitud en la cuantificación de la misma y excelente
precisión en lo que respecta a su reproducibilidad.
La base del RIA la constituyen las reacciones inmunológicas, de gran especificidad:

Cuando se mezcla un antígeno con otro marcado con un isótopo radiactivo y con
suanticuerpo específico que se encuentra en menor cantidad que éstos, los dos
antígenos competirán por ocupar los lugares específicos de unión al anticuerpo:

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Leticia de la Cueva

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Como resultado de esta unión competitiva, cuando aumenta la concentración de
antígeno marcado en la mezcla, disminuye la cantidad de antígeno no marcado ligado a
losanticuerpos:

Es fácil ver que cuanto más antígeno se añade al anticuerpo, menos radiactividad
tendrán los complejos Ag-Ac resultantes, existiendo una relación inversa entre la
cantidad de sustancia que queremos medir y la radiactividad, que puede medirse tras
separar los complejos de los antígenos libres. La presencia de antígeno marcado nos
permite saber lo que ocurre con el antígeno sinmarcar, es decir con la sustancia que
queremos cuantificar.
La concentración de antígeno en una muestra de un paciente se determina
comparando la actividad ligada con la existente en una serie de patrones o estándares
que contienen cantidades conocidas del antígeno a estudio, que constituyen la llamada
curva patrón o estándar.

1. Desarrollo de las pruebas de RIA
El proceso común de lastécnicas de RIA incluye la preparación de la muestra del
paciente y la del anticuerpo y el antígeno marcado, estos últimos distribuidos de forma
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comercial en "kits" de fácil utilización. No obstante, es vital para la seguridad de la prueba,
el almacenamiento, manipulación y una cuidadosa reconstitución del "kit" cuando suscomponentes se encuentran liofilizados.
Una vez mezclados los antígenos y el anticuerpo, y tras añadir un “tampón” que
facilite la formación de inmunocomplejos (Ag-Ac), se incuban durante el tiempo necesario
para alcanzar el equilibrio de reacción. A continuación se separan las fracciones unidas (B)
de las libres (F) y se procede al contaje de la radiactividad de los complejos formados.

2.Elementos del RIA
El antígeno marcado. El trazador más frecuentemente utilizado es el yodo, por ser
de fácil unión a polipéptidos (la mayoría de antígenos). En la actualidad el 125I es el
trazador de elección frente al 131I utilizado hasta hace unos años, por tener una vida
media más larga (60 días frente a 6 del 131I), mayor eficiencia de contaje, ser más barato
y presentar una menor...