Reacciones de transaminacion

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BIOQUIMICA
PRÁCTICA:
REACCIONES DE TRANSAMINACION Y SU
RECONOCIMIENTO POR MEDIO DE CROMATOGRAFIA EN
PAPEL


DISCUSIONES:
En la primera experiencia se prepararon dos tubos, El tubotestigo y
el problema a los dos se les agrego una preparación cruda de transaminasa, por obvias razones queremos cuantificar la actividad de dicha enzima, posteriormente se agrego un regulador defosfatos a ph de 7.4esto por que la transaminasa presenta su mayor actividad a dicho ph.
Seguido de esto se agrego alanina a los dos tubos, recordemos que la
Transaminasa transformara la alanina a sucorrespondiente alfa ceto
Acido, y dará paso al acido glutámico. Es el acido glutámico lo que se
Pretende cuantificar, sin embargo al testigo problema se le agrego el
Acido alfa ceto glutarico, porlo que es obvio que presentara actividad,
Pero al testigo solo se le agrego agua, por lo que en teoría no debe presentar actividad. Después de una incubación a 37 grados centígrados se procedió aagregar alcohol 96º esto para detener la actividad enzimática.
Seguido de la primer experiencia, en la segunda se hizo un cromatograma y se marcaron 4 puntos los cuales consistían en : los primeros5 de diferentes concentraciones de acido glutámico, esto fue para construir nuestra curva tipo a diferentes concentraciones, en los 4 puntos restantes se agregaron concentraciones de los tubosproblema y testigo, de agua y de alanina, la concentración del tubo problema fue para medir la actividad de la enzima transaminasa, ya que fue el único tubo en el que se añadió el acido alfa cetoglutarico, el tubo testigo se añadió como parámetro para obtener la actividad de la enzima, ya que usamos una preparación cruda de hígado, esta preparación cruda tiene acido alfa ceto glutarico, la mismaconcentración inicial que el problema, por lo que se procede a colocarla en el cromatograma y restársela al del tubo problema, para obtener la cantidad real de acido alfa ceto glutarico que pudo ser...
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