Recuento de leucocitos

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Los ensayos inmunológicos se basan en la especificidad de la unión Ag.- Ac. La unión antígeno- anticuerpo depende de la complementariedad entre ambas moléculas.
En la interacción in vitro de un Ag. con su
correspondiente Ac. se distinguen 2 etapas
1º Interacción primaria: unión de un Ag. y su
correspondiente Ac. No es visualizable directamente y no es demasiado influenciada por latemperatura, la concentración salina o la fuerza iónica ni la agitación. Sólo depende de la complementariedad.
2º Interacción secundaria: los complejos iníciales,
se agregan para dar diferentes fenómenos visibles cuya característica dependerá principalmente de la naturaleza del antígeno. Esta etapa se acelera con la temperatura, la agitación y es dependiente de la concentración de electrolitos.
Lasreacciones de interacción secundarias son:
Precipitación:
En este caso el antígeno es una molécula soluble y al ponerse una solución del mismo, en contacto con los anticuerpos que originó, se forman complejos Ag-Ac que al insolubilizarse en su mayor parte, dan una reacción de precipitación, se desarrolla rápidamente formándose los complejos Ag-Ac. después los complejos se agregan formandomicelas o redes que al alcanzan determinado tamaño y precipitan. Esta etapa se acelera con el aumento de la Tº (se la lleva a cabo normalmente a 37ºC) y es además dependiente de la concentración de electrolito.

Tema 2: Técnicas de precipitación
Difusión pasiva (Medio líquido)
Se pondrá anticuerpo y antígeno y se dejarán que difundan sin forzarlos. Si lo hacemos en medio líquido se conoce comotécnica de difusión doble.

No es una buena técnica para cuantificar, debido a su falta de precisión. Existen otras dos técnicas de difusión pasiva, pero en lugar de utilizar medio líquido, utilizan geles semisólidos, También requieren un tiempo de incubación.
Difusión pasiva (Medio semisólido) Ouchterlony.
El nombre se debe al creador de la técnica. Se realiza sobre un portaobjetos. Sobre estese coloca una película de agar, y se hacen dos pocillos. En cada uno de esos pocillos se coloca antígeno y anticuerpo (Uno en cada pocillo). Lo dejamos difundir 16 horas normalmente. Si aparece entre ellos la línea de precipitación, habremos identificado aquello que buscábamos, ya sea antígeno o anticuerpo. No es muy sensible.

Además de la falta de sensibilidad, posee otro gran problema, quees la gran cantidad de muestra necesaria (En torno a microgramos), lo cual hace su uso limitado a ciertos ensayos y utilidades.
Su utilidad es la de comparar la línea de precipitado entre distintos antígenos. Podemos poner mas de un pocillo en dos pocillos y comparar ambos. Si la línea de precipitación es continua, los dos antígenos son iguales. Si son distintos tendremos dos redes de precipitadoque se cruzan. Puede detectar crossreacctividad o que alguno de los antígenos no se reconozca por el antígeno.
Como es un método cualitativo, podemos hacer diluciones seriadas y ver donde se pierde la banda, para poder cuantificar, pero es muy poco precisa, denominándose semicuantitativa. Es la técnica conocida como Ouchterlony de difusión pasiva doble.
Difusión pasiva (Medio semisólido)Inmunodifusión radial.
Se realiza en gel. El gel está embebido en uno de los reactivos, y hacemos un pocillo con diluciones en el otro (Ag-Ac). Dejamos difundir mucho tiempo. El Ag irá difundiendo, y al llegar a la zona de equivalencia ([Ac]"[Ag]) se formará precipitado. La distancia del punto central a la línea de precipitado es proporcional a la cantidad de Ag de la muestra. Al compararlo con unpatrón tendremos una cantidad.
Realizamos una recta patrón con las áreas de las muestras conocidas y extrapolamos a la muestra problema.

Todas estas técnicas de precipitación podemos agilizarlas en el tiempo, pudiendo en ciertas condiciones, como pH y corriente eléctrica, forzando el movimiento para que se vean antes. Son técnicas de difusión que ya no son pasivas, y suelen utilizarse por...
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