RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

Recuento diferencial de leucocitos

Objetivo: Efectuar el recuento diferencial de leucocitos de una muestra de sangre problema.
Fundamento: El colorante de Wright por ser un colorantepolicromatico actúa sobre los leucocitos, tiñéndolos de acuerdo a la afinidad de las células, dependiendo de que estas sean acidofilas o basofilas.

Material:
tubos de ensaye
pipeta Pasteurportaobjetos
gradilla metálica
puente de tinción

Reactivo:
1) EDTA
2) Colorante de Wright
3) metanol
4) buffer de Wright
5) aceite de inmersión

EQUIPO:
1) equipo de extracción de sangre2) microscopio óptico


Método:
Realizar el frotis de sangre.
Fijar el frotis de sangre en alcohol metílico absoluto durante 2 a 3 minutos.
Cubrir el frotis completamente con elcolorante. Después de 3 minutos añadir un volumen igual de amortiguador. Soplar ligeramente para mezclar uniformemente. Aparecerá un brillo metálico verde.
Después de 5 minutos enjuagar cuidadosamentecon agua de la llave ó amortiguador de fosfatos, al principio con chorro delgado y suavemente y después con el chorro fuerte para eliminar todo exceso de colorante. Limpiar el reverso delportaobjetos.
Dejar secar la tinción al aire libre
Observar la tinción con el objetivo de inmersión (100x). Los resultados esperados en la tinción son los siguientes:
Hematíes en color rosa.Núcleos de los leucocitos de azul púrpura.
Gránulos neutrónicos del citoplasma, lila ó violeta
Gránulos eosinófilos, rojo tirando a naranja.
Gránulos basófilos, púrpura tirando a azul oscuro.Plaquetas, color lila oscuro.
Citoplasma de los linfocitos, azul claro.
Citoplasma de los monocitos, ligero azul.
Contar 100 leucocitos, determinando cuantos son neutrofilos, eosinofilos,basofilos, linfocitos y monocitos.
Determinar los valores porcentuales, según la siguiente fórmula:
% eritrocitos diferenciados:(numero de leucocitos diferenciados/número total de leucocitos) por 100.