Referencias

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Referencias de artículos científicos
Aislamiento y cultivo de protoplastos a partir de hojas de café
Se estableció un método rápido para el aislamiento de protoplastos a partir de hojas de café. Fue posible liberar abundante cantidad de protoplastos en un período de incubación de cuatro horas en celulasa R-10 (3 pectoliasa Y-23 (0,5) y manitol (0,6M) a pH 5,8, en hojas jóvenes, con menos de unmes de edad, de plantas de Coffea arabica, C. canephora y de algunos híbridos entre estas dos especies. Tanto de plantas cultivadas "in vitro" como de invernadero. El mejor medio fue el A-43, modificado (sin KCl on con NH4Cl) en donde se obtuvo división y proliferación de células hasta formar colonias celulares; posteriormente estos pequeños callos murieron. Las divisiones ocurrieron enprotoplastos cultivados en la oscuridad a 25ºC y en concentración de aproximadamente 104 células por mililitro. Hubo respuesta diferencial de los genotipos de café ensayados, al cultivo "in vitro" de sus protoplastos. Se obtuvieron divisiones y formación de colonias celulares únicamente en la variedad Caturra de C. arabica y en uno de los cinco clones de C. canephora.
EL CULTIVO DE PROTOPLASTOS ENCITRICOS YSU POTENCIAL PARA EL MEJORAMIENTO GENETICO
Los cítricos constituyen el principal producto frutícola en el comercio mundial. A pesar de su alta capacidad para hibridarse en forma interespecífica e incluso intergenérica, la aplicación efectiva de programas de mejoramiento genético tradicional se ha visto limitada por una serie de factores biológicos propios del grupo, dentro de loscuales se incluyen una biología reproductiva muy compleja y períodos de juvenilidad prolongados. Algunas de éstas limitantes pueden obviarse en gran medida mediante la utilización de técnicas biotecnológicas, que involucran entre otras: el cultivo in vitro, el aislamiento, cultivo, regeneración, fusión y transformación de protoplastos y la formación de cíbridos. Éstas técnicas permiten laincorporación de características genéticas que son de gran utilidad para conferir resistencia o tolerancia contra enfermedades, plagas, y condiciones adversas, que afectan el rendimiento, así como mejorar la calidad del fruto. La diversidad genética que existe entre las especies de citrus y los géneros emparentados es muy grande y ha sido poco estudiada.
AISLAMIENTO ENZIMÁTICO DE PROTOPLASTOS A PARTIR DEMESÓFILO DE Dioscorea alata CULTIVAR “Pico de Botella”

Un protoplasto vegetal es una célula que carece de pared celular, se encuentra rodeada por su membrana plasmática y es potencialmente capaz de regenerar la pared celular, crecer y dividirse. El objetivo del trabajo fue evaluar diferentes concentraciones de enzimas comerciales y tiempos de acción en el aislamiento de protoplastos deDioscorea alata cultivar “Pico de Botella”. Los protoplastos fueron aislados del mesófilo de vitroplantas combinando concentraciones de las enzimas Celulasa Onozuka R10® (0,0 a 1,5% p/v) y Macerozima R10® (0,0 a 0,5% p/v), a tiempos de acción de 6 a 18h y pH de 5,6; exponiendo aproximadamente 0,015g de hoja en medio de aislamiento de protoplastos de ñame a 27±2 °C, 40 rpm, seguido de lavado en medio deaislamiento sin enzimas, purificación en sacarosa al 24%, resuspensión en medio de cultivo de protoplastos de ñame y conteo en cámara de Neubauer. La mayor cantidad de protoplastos se obtuvo con Celulasa al 1% y Macerozima al 0,5% en 18h de acción, con un promedio de 18,6 x106 protoplastos g-1 de tejido fresco. Los análisis de regresión (R2=0,84) de los datos obtenidos arrojaron, que lascondiciones óptimas para obtener la mayor cantidad de protoplastos aislados corresponden a una combinación de 0,96% de Celulasa y 0,36% de Macerozima, a 13,99 h de acción, estimando un valor de 15,3x106 protoplastos g-1 de tejido. El método enzimático permite aislar protoplastos de ñame, recomendándose evaluar su viabilidad para regeneración su pared celular, crecer, dividirse y formar microcolonias y...
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