Rio yautepec

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DETERMINACION DEL NUMERO MAS PROBABLE (NMP) DE COLIFORMES TOTALES EN EL RIO DE YAUTEPEC DE ZARAGOZA MORELOS

PRACTICA 6
F.C.Q.I.

OBJETIVO

Establecer un método para la detección y enumeración en agua de organismos coliformes totales presentes en una serie de muestras de agua.

INTRODUCCION

Técnica de NMP (número más probable)

Cantidad deorganismos por unidad de volumen que, de acuerdo con la teoría estadística, produciría el resultado analítico observado con mayor probabilidad que cualquier otra cantidad, o bien que produciría el resultado analítico observado con la mayor frecuencia.

Se expresa como densidad de organismos/100 ml. Los resultados se calculan a partir del número de hallazgos positivos de organismos delgrupo coliforme producidos por siembras realizadas con diluciones decimales múltiples. Generalmente se utiliza para las bacterias coliformes.

Parámetros en el agua

Este método es aplicable para todo tipo de agua, incluyendo aquellos que contienen una cantidad apreciable de materia en suspención.

La presencia y extensión de contaminación fecal es un factor importante en ladeterminación de la calidad de un cuerpo de agua. Las heces contienen una variedad de microorganismos y formas de resistencia de los mismos, involucrando organismos patógenos, los cuales son un riesgo para la salud publica al estar en contacto con el ser humano. El examen de muestras de agua para determinar la presencia de microorganismos del grupo coliforme que habitan normalmente en le intestino humanoy de otros animales de sangre caliente, da una indicación. Dada la limitada capacidad de algunos miembros del grupo de organismos coliformes para sobrevivir en agua; sus números también pueden emplearse para estimar el grado de contaminación fecal.

Organismos coliformes.- Organismos capaces de crecimiento aeróbico ya sea 308 ± 1k (35 ± 1°C) ó 310 ± 1k (37 ± 1°C) en un medio de cultivo líquidolactosado con producción de ácido y gas dentro de un periodo de 48 h.
Organismos coliformes fecales (termotolerantes). Organismos coliformes como se describe anteriormente que tienen las mismas propiedades fermentativas a 317 ± 0.5k (44 ± 0.5°C).

PRINCIPIO DEL METODO EMPLEADO

El método se basa en la inoculación de alicuotas de la muestra, diluida o sin diluir, en una serie de tubos deun medio de cultivo liquido conteniendo lactosa. Los tubos se examinan a las 24 y 48 horas de incubación ya sea a 308 o 310k (35 o 37°C). Cada uno de los que muestran turbidez con producción de gas se resiembra en un medio confirmativo más selectivo y, cuando se busca E. coli presuntiva, en un medio en el que se pueda demostrar la producción de indol. Se lleva acabo la incubación de estos mediosconfirmativos basta por 48 horas ya sea 308 ó 310k (35 o 37°C) para la detección de organismos coliformes y a 317k (44°C) para organismos termotolerantes y E. coli.

Mediante tablas estadísticas se lleva acabo él calculo del numero más probable (NMP) de organismos coliformes, organismos coliformes termotolerantes y E. coli que pueda estar presente en 100 cm3 de muestra, a partir de losnúmeros de los tubos que dan resultados confirmativos positivos.

APARATOS Y EQUIPO

Aparte de los equipos que se suministran estériles, el material de vidrio y el resto del equipo deben esterilizarse.

• Incubadora capaz de mantener una temperatura de 308 ± 1k (35 + 1°C) ó 310 ± 1k
• (37 ± 1°C) y 317 ± 0.5k (44 ± 0.5°C).
• Estufa capaz de mantener una temperatura de 453 a473k (180 a 200°C).
• Autoclave u olla de presión o con manómetro.
• Potenciometro.
• Balanza analítica con sensibilidad de 0.0001 g.
• Pipetas serológicas.
• Pipeteros de aluminio o acero inoxidable; se pueden sustituir con papel aluminio o
• papel Kraft.
• Tubos de ensaye de cristal refractario de 15mm x 150 mm con tapón de baquelita,
• aluminio o algodón....
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