Sangre De Campeón, Invencible

Caracterización físico–química del polisacárido Vi de
Salmonella typhi
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Ileana Martínez , Yanín Muñoz , Luis Riverón , Milagros Duarte , Christopher Jones , Xavier Lemercinier ,
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Nápoles , Xenia Muñoz .

Lilian

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Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, Cuba.
Instituto Cubano de InvestigacionesNacionales del Azúcar (ICINAZ). Ciudad de La Habana, Cuba
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National Institute for Biological Standards and Control (UK).
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En este trabajo de caracterización del polisacárido Vi de Salmonella typhi se proporcionan algunas herramientas para la
determinación de propiedades estructurales que permitan reforzar los estudios de estabilidad (viscosidad, rotación óptica,
espectros de resonanciamagnético nuclear), de identidad y pureza. Los resultados sugieren que es un producto apirogénico
viscoso, con alto contenido de humedad, con alto grado de sustitución de los grupos O-acetilo, con actividad óptica y
estructura similar a la de los polisacáridos de referencia internacionales, determinada por resonancia magnético nuclear.
Palabras claves: Polisacárido Vi, Salmonella typhi,caracterización.

Introducción
La incidencia mundial anual de la fiebre tifoidea excede los
12,5 millones de casos, muchas veces con una alta
mortalidad. El agente causal de esta enfermedad es
Salmonella typhy, bacteria gramnegativa encapsulada. La
infección produce fiebre, hemorragia gastrointestinal, toxemia
sistémica y otras implicaciones (1).
Uno de los factores de virulencia más conocidos es elantígeno
de superficie Vi (polisacárido capsular Vi), el cual es de gran
interés por su empleo potencial en vacunas (1). Está
constituido por la unidad repetitiva del ácido (1→4) N-acetil αD galactosaminurónico, de manera que se presenta como un
homopolímero lineal O-acetilado en la posición del carbono 3
(2).
Se conoce que los grupos O-acetilo de este polisacárido
suelen ser dominantes enla respuesta inmune (3); su peso
molecular es también importante en la inmunogenicidad y la
actividad protectora contra la infección por Salmonella typhi
(4).
Resultan pocos los métodos recomendados por la
Organización Mundial de la Salud (OMS) para el control del
polisacárido Vi vacunal, por lo que continúa la búsqueda
incesante y la incorporación de nuevas técnicas que
enriquezcan elconocimiento en la caracterización de esta
biomolécula. Estos métodos deben ser reproducibles,
específicos y sensibles ante cambios estructurales y en
muchos casos, deben servir como complemento de los que ya
existen para el estudio de la estabilidad del producto.
El objetivo de este trabajo es caracterizar el polisacárido Vi de
Salmonella typhi, producido en el Instituto Finlay, desde elpunto de vista físico-químico, mediante el uso de técnicas
como la cromatografía en gel, viscosidad, rotación óptica
específica, resonancia magnético nuclear (RMN) y

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electroforesis en geles de poliacrilamida (esta última para la
determinación cualitativa de lipopolisacárido).

Materiales y Métodos
Muestras. Se emplearon 4 lotes de polisacárido Vi purificado,
obtenidos a partir de unacepa de Salmonella typhi, cuya
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fórmula antigénica es 9,12[Vi]:d y conservados a –20 C
(Instituto Finlay, Cuba). Previo a la caracteriza-ción, los lotes
7003, 7004, 7005 fueron evaluados por el Laboratorio de
Control de Proceso, según los requisitos recomendados por la
OMS (2). Las muestras fueron secadas a vacío sobre CaCl2, a
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4 C, durante 24 h y resuspendidas en agua destilada o en elsolvente específico para la evaluación.

Métodos
Contenido de humedad. La evaluación se realizó a través del
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análisis termogravimétrico a 100 C y por secado a vacío con
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la modificación del empleo de CaCl2, a 4 C (2).
Determinación del contenido de grupos O-acetilo. Se
utilizaron soluciones de referencia de cloruro de acetilcolina
con un rango de concentraciones de 1,66 a 8,3 µmol...