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UANL FCB

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS




Genética
















INTRODUCCIÓN.
SDS-PAGE 
SDS-PAGE es la electroforesis de proteínas más ampliamente usada. Su nombre significa la electroforesis en geles de poliacrilamida que se realiza en presencia de SDS ('SDS-polyacrilamide gelelectrophoresis'). Fue descrito por Laemmli (Laemmli (1970), Nature, 277, p. 680). Se trata de un tipo de electroforesis desnaturalizante en la que las muestras se desnaturalizan por calor en presencia deagentes desnaturalizantes (beta-mercaptoetanol, que destruye los puentes disulfuro, SDS que desnaturaliza y recubre a la proteína con cargas netas negativas), y se separan como cadenas polipeptídicasaisladas.
En general se emplean sistemas de dos tampones (discontínuos). Este sistema permite la separación de volúmenes relativamente grandes de muestra sin pérdida de resolución. La concentraciónse produce por isotacoforesis de la muestra en el primer gel ('stacking'). El efecto de estrechamiento de las bandas se basa en el hecho de que los iones glicinato, relativamente cargados negativamente(en el depósito de tampón superior) tienen una movilidad electroforética inferior que los complejos de proteínas-SDS. Que a su vez tienen menor movilidad que los iones Cl- de los tampones de carga enel gel de apilamiento ('stacking'). Cuando se conecta la diferencia de potencial todas las especies han de migrar a la misma velocidad para mantener el circuito eléctrico. Los iones glicinato sólo sepueden desplazar a la misma velocidad que los iones Cl- si hay una región de'field strenght'. 'Field strenght' es inversamente proporcional a la conductividad que es a su vez proporcional a laconcentración, El resultado es que las tres especies de interés ajustan sus concentraciones de forma que [Cl-] > [proteína-SDS] > [glicinato]. Como sólo hay una pequeña concentración de proteína-SDS las...