seminario 1

Por los años 1950, los científicos se dieron cuenta que el adn sostenía un código que permitía que las proteínas fueran sintetizadas, sin embargo, como una cadena de aminoácidos se plegaba completamente en una proteína funcional, con la apropiada estructura tridimensional permanecía como un misterio. Un mecanismo debe existir para asegurar el apropiado plegamiento de la proteína. Pero ¿Dedónde viene esa información ? ,En 1957 Christian Anfinsen publico la primera evidencia de que la información para el apropiado plegamiento venia retenida dentro de la proteína misma.
Antecedentes
Las proteínas son formadas de combinaciones de 20 aminoácidos que luego se pliegan en estructuras complejas. La cadena de aminoacidos no plegada recibe el nombre de estructura primaria. Para teneractividad biológica, la proteína debe plegarse en estructuras secundarias y terciarias. Estas estructuras son retenidas juntas por interacciones químicas éntrelos lados de las cadenas de aminoacidos, incluyendo enlaces de hidrógeno, interacciones hidrofobicas y a veces enlaces covalentes. Como estas estructuras superiores se forman por mucho ha sido un misterio. ¿la proteina se pliega correctamentea medida que es sintetizada o esta requiere la acción de otras proteínas para plegarse correctamente? ¿puede plegarse correctamente por si sola de manera espontanea? .
En los años 1950, Anfinsen era un bioquímico interesado en el correcto plegamiento de las proteínas , Especialmente el estaba investigando la formación de puentes disulfuros, que son enlaces covalentes entre el lado de la cadena decisteína que sirve como uno de los mayores pilares manteniendo juntas las estructuras de proteínas secretadas. El creyó que la proteína por si misma contenia toda la información necesaria para el correcto plegamiento de la proteína. El propuso la ‘’hipótesis termodinamica’’ que declaraba que la estructura activa biológicamente de la proteína era también la mas estable termodinámicamente bajocondiciones en vivo, en otras palabras, si las condiciones intracelulares pudieran ser imitadas en un tubo de ensayo entonces la proteína podría ser naturalmente plegada en su activa conformación, el empezó su trabajo en una enzima secretada de bovino pancreática ribonucleasa y estudio su habilidad para plegarse apropiadamente fuera de la celula.
El experimento
Las proteínas realizan una ampliavariedad de funciones en la celula independiente de su función, una proteína debe ser apropiadamente plegada para llevar a cabo su rol biológico. Para los estudios del plegamiento de la proteína es mejor estudiar una enzima de la cual la actividad biológica pueda ser fácilmente monitoreada* (by performing )en vitro. Anfinsen escogio una pequeña, proteína secretada, la enzima ribonucleasa, en lacual el pudo monitorear el apropiado plegamiento por el análisis de su capacidad para catalizar la división(se refiere a separación o hendidura) de arn.
La ribonucleasa, una proteína secretada esta activa bajo condiciones oxidantes en vitro. La estructura terciaria de la ribonucleasa activa es retenida junta por 4 puentes disulfuro.
Agregando un agente reductor, el cual reduce el enlacedisulfuro entre 2 lados de las cadenas de cisteinas a 2 grupos sulfidrilos libres, puede interrumpir esta interaccion covalente. Completar la desnaturalización de la ribonucleasa requiere un tratamiento con un agente reductor. Anfinsen monitoreo la reducción de la ribonucleasa por la medición del numero de grupos de sulfidrilos libres presentes en una proteína. En el estado oxidado no hay grupossulfidrilos en la ribonucleasa por que cada residuo de la cisteína esta implicado en un enlace disulfuro. En el estado completamente reducido, por otro lado, la ribonucleasa contiene 8 grupos sulfidrilos libres. Anfinsen exploro esta diferencia para evaluar el grado de reducción usando un ensayo espectrofotométrico para valorar el numero de grupos sulfidrilos. Para estudiar el plegamiento de la...