Separacion caseina

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PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATOLICA DE CHILE
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FACULTAD DE QUIMICA

Curso QIM117

Sección 1

Profesora Jacqueline Alea

Fecha de ejecución: 22 de Marzo 2011

EXPERIENCIA 1
Aislamiento, Purificación y Cuantificación de la a-Lactoalbúmina

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OBJETIVOS

OBJETIVOGENERAL: Aislar y purificar una de las proteínas de la leche de vacuno.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:
1.-Aislar y purificar la α-lactalbúmina de la leche.
2.-Cuantificar la α-lactalbúmina de la leche.

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RESULTADOS

Para el proceso de aislamiento y purificación de la α-lactalbúmina presente en la leche de vacuno fue necesario llevar a cabo ciertoscambios de pH, con estos cambios de pH se fue precipitando y separando interferentes en la obtención de la proteína de interés reconociendo que esta proteína tiene ciertas características que la vuelven soluble dentro de un rango de pH determinado. En esta primera etapa se utilizó 5ml de ácido acético concentrado luego de haber calentado 50 ml de leche de vacuno a baño de María y una posteriorfiltración en embudo Buchner, el primer precipitado de esta muestra de leche de vacuno contenía la proteína más abundante presente en la leche que es la Caseína, junto con la grasa de la leche de vacuno. Se prosiguió trabajando con la disolución acuosa y se descartó el precipitado, a la disolución se le agregó ácido clorhídrico hasta llevar a pH 3, luego de un centrífugado se obtuvo un precipitado conla a-Lactoalbúmina, pero para una mayor purificación se llevo a cabo un nuevo cambio de pH agregando al precipitado 10 ml de agua destilada y posteriormente llevando la disolución a pH 8.5-9.0 con hidróxido de sodio 1 Molar.

Para la cuantificación de la proteína fue utilizado el método de Biuret, para esto fue necesario hacer distintas disoluciones patrónes con el reactivo de Biuret y unamuestra de a-Lactoalbúmina estándar que contenía 257,5mg/50ml, luego de esperar 20 minutos se midió la absorbancia de cada una de las disoluciones patrones a 540 nm y se realizó una curva de calibración para finalmente poder medir la absorbancia de la muestra problema de cual se desconoce la concentración de la a-Lactoalbúmina.

La tabla es la siguiente:

Tubo | ml de solución estándar | Reactivode Biuret | ml de agua | Absorbancias |
1(blanco) | 0,00 | 4ml | 2,50 | 0 |
2 | 0,25 | 4ml | 2,00 | 0,017 |
3 | 0,50 | 4ml | 1,50 | 0,043 |
4 | 0,75 | 4ml | 1,00 | 0,084 |
5 | 1,00 | 4ml | 0,75 | 0,116 |
6 | 1,50 | 4ml | 0,50 | 0,137 |
7 | 2,00 | 4ml | 0,25 | 0,216 |
8 | 2,50 | 4ml | 0,00 | 0,266 |
Muestra | 1,00 | 4ml | 0,00 | 0,02 |Tabla Gráfico curva de calibración

Tubo | Absorbancia | Concentración de proteína (mg/ml) |
1(blanco) | 0,00 | 0 |
2 | 0,017 | 0,515 |
3 | 0,043 | 1,03 |
4 | 0,084 | 1,545 |
5 | 0,116 | 2,06 |
6 | 0,137 | 3,09 |
7 | 0,216 | 4,12 |
8 | 0,266 | 5,15 |
Muestra | 0,02 | X |

Gráfico absorbancia v/s Concentración de Proteína (mg/ml)

De el gráfico cuya ecuación de la rectaes Y= 0,052X-0,004 se puede obtener la concentración de la proteína dada la absorbancia obtenida que fue de 0,02 nm; el resultado final de la concentración de la muestra es de 0,4614 mg/ml de concentración de la proteína, teniendo en cuenta que hay errores de cálculo estadísticos este es el resultado que se obtiene a partir de la ecuación de la recta.-------------------------------------------------
DISCUSIÓN

El proceso de aislamiento, purificación y cuantificación de proteínas en general está basado en previos conocimientos teóricos que se tiene acerca de éstas, como sus características físicas, químicas, biológicas y bioquímicas; para ser mas específicos la separación de una proteína de otras se basa principalmente en una característica especial de estas que es el denominado...
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