Separacion de azul de metileno y fluoresceina

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I NSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA DE AZUL DE METILENO Y FLUORSCEÍNA USANDO CROMATOGRAFÍA POR ADSORCIÓN

ALUMNA: ZÚÑIGA GONZÁLEZ KAREN NAYELI

PROFESOR: ARTURO RIVAS FARIAS

GRUPO: 4IM1

SECCIÓN: 1

MÉTODOS QUÍMICOS DE ANALISIS

FECHAS DE ELABORACIÓN: 9 Y 14 DE FEBRERO

ENTREGA: 23/FEBRERO/2011

SEPARACIÓN DE UNAMEZCLA DE AZUL DE METILENO Y FLUORESCEÍNA USANDO CROMATOGRAFÍA POR ADSORCIÓN

DATOS EXPERIMENTALES E INFORME
Tabla 1. Valores de absorbancia obtenidos para la separación de fluoresceína y azul de metileno.

No de Tubo Volumen de elución
(mL) A493 Corregida A668 Observaciones
1 3 0.001 0.005 Transparente
2 6 1.906 0.002 Verde
3 9 0.992 0.003 Verde
4 12 0.049 0.001 Verde/transparente
5 15 -0.003 0.004 0.002 Verde/ transparente
6 18 -0.005 0.002 0.001 Transparente
7 21 -0.003 0.004 0.003 Transparente
8 24 -0.003 0.004 0.003 Transparente
9 27 -0.001 0.006 0.003 Transparente
10 30 0.008 0.004 Transparente/ mezcla
11 33 0.003 0.005 Transparente
12 36 0.004 0.011 Transparente
13 39 0.017 0.364 Azul
14 42 0.054 1.855 Azul
15 45 0.031 1.371 Azul
16 48 0.0080.583 Azul/transparente
17 51 -0.002 0.005 0.254 Azul/transparente
18 54 -0.005 0.002 0.082 Azul/transparente
19 57 -0.006 0.001 0.046 Azul/transparente
20 60 -0.007 0.000 0.018 Azul/transparente
21 63 -0.007 0.000 0.015 Transparente
22 66 -0.007 0.000 0.013 Transparente
2. PERFIL DE ELUCIÓN



Interpretación de resultados

La Fluoresceína Disódica es el compuesto que eluye primero ytiene una mayor asorbancia a 493 nm.

El Azul de metileno es el segundo componente en salir de la columna y su mayor absorción es a 668 nm.

Se observa que hay una distancia de separación considerable entre ambos compuestos lo cual quiere decir que se separan sin problemas por que sus componentes son diferentes.

ELEMENTOS CROMATOGRÁFICOS

Fase estacionaria: Es el compuesto que actúacomo adsorbente dentro de la columna.

Fase móvil: Es o son los compuestos químicos que pasan a través de la columna, estas sustancias son los solventes que dependiendo de la polaridad de cada soluto hacen que eluya el más afin a él.

Soporte: Es donde se lleva a cabo la separación de la mezcla de compuestos, esta solo sirve para mantener la elución es inerte a las reacciones que se llevan acabo, en nuestro caso es la columna.

Mezcla o solutos a separar: Son los compuestos químicos que están unidos en una dilución.

ADSORCIÓN
La adsorción es el proceso mediante el cual un sólido poroso (a nivel microscópico) es capaz de retener partículas de otra sustancia en su superficie tras entrar en contacto con éste.
Es un fenómeno de superficie donde las moléculas de una determinadasustancia (adsorbato) interactúan con las moléculas de otro compuesto (adsorbente), que tiene sus cargas desestabilizadas en la superficie debido a las fuerzas intermoleculares de determinado adsorbente.


CONSIDERACIONES PARA MODIFICAR EL ORDEN DE ELUCIÓN
SOLUTOS A SEPARAR



FLUORESCEÍNA DISÓDICA

AZUL DE METILENO

FASE ESTACIONARIA

ALÚMINA DE BROCKMAN

(Al2(OH)3)2CO3-H2OFASE MÓVIL

ETANOL ACIDO

CH3-CH2-OH-H3O + Cl

FUERZAS INTERMOLECULARES QUE PARTICIPAN EN EL PROCESO DE SEPARACIÓN

FUERZAS LONDON DIPOLO-DIPOLO

FUERZAS DE VAN DER WAALS

FUERZAS ELECTROSTÁTICAS


PUENTES DE HIDROGENO

MODIFICACIONES PARA INVERTIR EL ORDEN DE ELUCIÓN.

La fluoresceína disódica es más afín al agua que a la alúmina debido a las cargas netas, la de la alúmina leconfiere en mayor proporción una carga negativa y en la fluoresceína también, ya que las moléculas de sodio están disueltas en el medio, por ello eluye con el agua.

El azul de metileno tiene carga positiva en el medio, por ello se adhiere con mayor fuerza a la alúmina y entonces, para que eluya se necesita un disolvente que sea más soluble con esta sustancia en este caso es el etanol, para...
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