Separacion de pigmentos vegetales mediante cromatografia sobre papel

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  • Publicado : 13 de junio de 2010
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“SEPARACION DE PIGMENTOS VEGETALES MEDIANTE CROMATOGRAFIA SOBRE PAPEL”

Introducción: Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores: clorofila-a(verde intenso), clorofila-b (verde), carotenos (amarillo claro) y xantofilas (amarillo anaranjado) en diferentes proporciones. Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en disolventesapolares, lo que permite su separación cuando una solución de las mismas asciende por capilaridad a través de una tira de papel poroso (papel de cromatografía o de filtro) dispuesta verticalmente sobre una película de un disolvente orgánico (etanol), ya que las mas solubles se desplazaran a mayor velocidad, pues acompañaran fácilmente al disolvente a medida que esta asciende. Las menos solublesavanzaran menos en la tira de papel de filtro.
Apareceran, por lo tanto, varias bandas de diferentes colores (asta siete o mas, dependiendo del material utilizado) que estarán mas o menos alejados de la disolución alcohólica según la mayor o menor solubilidad de los pigmentos. Estas bandas poseerán diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento de la disolución.Material:
* Mortero
* Tijeras
* Espinacas u hojas verdes
* Tubo de ensayo en gradilla
* Alcohol metílico puro (cuidado, sus vapores son muy toxicos)
* Éter etílico
* Capsula de Petri o vaso de precipitado
* Capilar o micro pipeta (cuenta gotas en su defecto)
* Tira de papel cromatografico (con un buen papel de filtro se obtienen, incluso, mejores resultados).Técnica:

* Colocar en un mortero trozos de hojas de espinacas lavadas, quitando las nerviaciones mas gruesas, junto con 10 o 15 cc de éter etílico.

* Triturar sin golpear hasta que el liquido una coloración verde intensa (utilizar campana de gases a lo largo de toda la practica).

* Filtrar en un embudo con papel de filtro y recoger en un tubo de ensayo (es suficiente con 2 o 3 cc desolución de pigmentos).

* Colocar una tapadera de una caja de petri metanol absoluto hasta una altura de 0.5 a 1 cm.

* Cortar una tira de papel de filtro de unos 8 cm de anchura y unos 10 a 15 cm de altura.

* Poner con el capilar en el papel de cromatografía entre 5 y 10 gotas de solución de pigmentos, espaciadas en el tiempo con el fin de que vaya sacándose el éter etílico yaumente la cantidad de pigmentos. Las gotas se pondrán siempre en el mismo punto (se puede mar con un lápiz ), situado a los 2 cm por encime del borde inferior del papel.

* Doblar el papel cromatrográfico con una pinza a un soporte horizontal coocar en el borde del vaso (por ejemplo, una varilla de vidrio).

* Espera unos30 minutos y observa

Cuestiones Y Resultados
1.-La solubilidad enalcohol de los pigmentos es, de mayor a menor:carotenos, clorofila a, clorofila b y xantofila. Indicar que pigmento corresponde a cada banda.


2.- ¿Por qué empleamos éter etílico para extraer la clorofila?
La clorofila se asocia con lípidos y proteínas hidrofobicas de las membranas fotosintéticas, la clorofila son compuestos insolubles en agua pero solubles encompuestos orgánicos tales como acetona, alcohol, cloroformo, eter dietilico, etc. estas sustancias extraen cualquier compuesto soluble en ellas como: resinas, ceras, pigmentos (como la clorofila), hormonas liposolubles, vitaminas liposolubles y otros lipidos, etc. cuando las pruebas con eter o cetona se le realiza a plantas fibrosas, como las gramíneas (gramas, pastos) casi todo lo extraido es clorofila3.- ¿Qué Pigmentos son los más abundantes?
La caroteno y la xantofila
4.-Por encima de las clorofilas aparece mas de una banda, ¿Qué significado tiene?
CATOTENO: Generalmente se conoce como caroteno al compuesto químico llamado más específicamente β-caroteno (leáse beta-caroteno). Este es el carotenoide más abundante en la naturaleza y el más importante para la dieta humana, por lo que da...
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