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GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS

INGENIERÍA GENÉTICA 2011

Inducción génica e interacciones proteína-proteína en el marco de la respuesta al daño al ADN

Docentes:

Lic. Juan Jose Bonfiglio Dra. Luciana Giono Dr. Manuel J. Muñoz Dr. Federico Pelisch Dr. Flavio de Souza

Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, UBA

Cronogramatentativo – Diciembre 2011
LUNES 5
9 a 10 10 a 11 11 a 12 12 a 13 13 a 14 14 a 15 15 a 16 16 a 17 17 a 18 ALMUERZO Binding a glutatiónsefarosa Explicación: SDS-PAGE Lavados (recombinantes) y armado de geles Pull-down y armado de geles "Seminario" Pelisch-Muñoz ALMUERZO ALMUERZO FERIADO FERIADO INTRODUCCIÓN AL TP Explicación: Proteínas recombinantes Cuantificación de proteínas recombinantesExplicación: Interacciones proteína-proteína Corrida de geles, transferencia y bloqueo

MARTES 6

MIERCOLES 7

JUEVES 8

VIERNES 9

Discusión parte PROTEINAS

LUNES 12
9 a 10 Revelado western blot 10 a 11 11 a 12 12 a 13 13 a 14 14 a 15 Extracción de ARN 15 a 16 16 a 17 ALMUERZO Explicación: Extracción de ARN

MARTES 13
Cuantificación de ARN y chequeo por gel de agarosa.MIERCOLES 14

JUEVES 15

VIERNES 16

Retro-transcripción y PCR en tiempo real.

Consultas

Parcial

ALMUERZO

ALMUERZO

Explicación: Retrotranscripción y PCR en tiempo real.

Discusión resultados PCR en tiempo real.

2

Índice
Cronograma .......................................................................................................................... Índice.................................................................................................................................... Introducción .......................................................................................................................... El daño al ADN ......................................................................................................................Modelo de estudio ................................................................................................................ PARTE I – Proteínas Producción y purificación de proteínas recombinantes ....................................................... Estudio de interacciones proteína–proteína ........................................................................ Análisis deinteracciones proteína-proteína por western blot ............................................. Trabajo Práctico de Ingeniería Genética .............................................................................. 1. Purificación de proteínas fusionadas a GST ............................................. ............ Protocolo de preparación de geles de poliacrilamida, siembra y corrida electroforérica.............................................................................................. Protocolo de tinción con Coomassie brillant blue ......................................... 2. GST Pull-down ....................................................................................................... Protocolo de pull-down................................................................................. 3. Western blot ......................................................................................................... Western blot – incubación con anticuerpos .................................................. Western blot- revelado ................................................................................. PARTE II – Ácidos Nucleicos Purificación de ARN total...................................................................................................... Cuantificación de ARN .......................................................................................................... Integridad del ARN ................................................................................................................ Detección de un ARNm específico...