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Determinación de Staphylococcus aureus
B.11.1 Fundamento
Este método permite hacer una estimación del contenido de Staphylococcus aureus en alimentos, se efectúa directamente en placas de medio de cultivo selectivo y diferencial, con la confirmación mediante las pruebas de coagulasa y termonucleasa. Este método es adecuado para el análisis de alimentos en los cuales se esperen más de 100células de Staphylococcus aureus por g.
B.11.2 Materiales y Equipo
Todos los instrumentos que se utilicen para trabajar la muestra deben esterilizarse mediante horno, durante 2 h de 170-175ºC o como alternativa en autoclave durante 15 min como mínimo a 121ºC ±1.
B.11.2.1 Cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas y separador de huevo.
B.11.2.2 Tubos de cultivo de 16 mm x 150 mm o frascos de 125a 250 mL de capacidad, con tapón de rosca.
B.11.2.3 Tubos de cultivo de 10 mm x 75 mm, con tapón de rosca.
B.11.2.4 Cajas Petri de 90 a 100 mm de diámetro.
B.11.2.5 Pipetas bacteriológicas de 1 mL y 10 mL de capacidad graduadas en 0,1 mL y 1 mL respectivamente y diámetro de 2 a 3 mm.
B.11.2.6 Pipetas Pasteur.
B.11.2.7 Probetas.
B.11.2.8 Varillas de vidrio de 3,5 mm de diámetroaproximadamente y 20 cm de largo dobladas en ángulo recto, o varillas de plástico estériles desechables.
B.11.2.9 Matraz Erlenmeyer con perlas de vidrio
B.11.2.10 Cámara húmeda: consiste en una caja Petri en la cual se coloca una varilla de vidrio en forma de "V" rodeada de algodón humedecido con agua.
B.11.2.11 Horno para esterilizar que alcance 180°C.
B.11.2.12 Autoclave con termómetro.
B.11.2.13 Bañode agua con regulador de temperatura de 35 ± 0,5ºC.
B.11.2.14 Baño de agua con regulador de temperatura de 45 ± 0,5ºC.
B.11.2.15 Balanza con capacidad no mayor de 2,500 g y sensibilidad de 0,1 g.
B.11.2.16 Incubadora a 35 ± 1ºC.
B.11.3 Reactivos
En caso de disponerse de fórmulas comerciales deshidratadas, para su preparación se deben seguir las instrucciones impresas en la etiqueta respectiva.Cuando se mencione agua debe entenderse que se trata de "agua destilada".
Los reactivos a emplear en el método objeto de esta norma deben ser grado analítico.
 
B.11.3.1 Soluciones Diluyentes
B.11.3.1.1 Solución Reguladora de Fosfatos (Solución concentrada)
FORMULA
 
INGREDIENTES
CANTIDADES
Fosfato monopotásico
34,0 g
Agua
1,0 l
 
Preparación
Disolver el fosfato en 500 mL de aguay ajustar el pH a 7,2 con solución de hidróxido de sodio 1N, aforar con agua a 1 l. Esterilizar durante 15 min a 121ºC ±1, conservar en refrigeración (solución concentrada). Tomar 1,25 mL de la solución concentrada y llevar a 1 l con agua (solución de trabajo). Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 mL según se requiera. Esterilizar a 121ºC ±1 durante 15 min. Después de la esterilización, losvolúmenes finales y el pH de la solución de trabajo deben ser iguales a los iniciales.
B.11.3.1.2 Agua Peptonada
FORMULA
 
INGREDIENTES
CANTIDADES
Peptona
1,0 g
Cloruro de sodio
8,5 g
Agua
1,0 l
 
Preparación
Disolver los componentes en un litro de agua. Ajustar el pH a 7,0 con solución de hidróxido de sodio 1N. Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 mL según se requiera. Esterilizar a121ºC ±1 durante 15 min. Después de la esterilización los volúmenes finales y el pH de la solución de trabajo deben ser iguales a los iniciales.
B.11.3.2 Medios de Cultivo
B.11.3.2.1 Medio de Baird-Parker
FORMULA
 
INGREDIENTES
CANTIDADES
Medio base (11.3.2.2)
95,0 mL
Solución de telurito de potasio (11.3.2.3)
1,0 mL
Emulsión de yema de huevo (11.3.2.4)
5,0 mL
 
Preparación
Cuando elmedio base esté a 45ºC, agregar los demás ingredientes y mezclar. Colocar de 15 a 20 mL del medio completo, enfriar y dejar solidificar. Las placas pueden almacenarse por 48 h a temperatura de 0 a 5ºC.
B.11.3.2.2 Medio base de Baird-Parker
FORMULA
 
INGREDIENTES
CANTIDADES
Triptona
10,0 g
Extracto de levadura
1,0 g
Extracto de carne
5,0 g
Glicina
12,0 g
Cloruro de litio
5,0 g...